安定したトランスフェクションとは、細胞への外来 DNA の長期導入です。安定的にトランスフェクトされた細胞は、外来DNAを子孫に伝えます。したがって、安定してトランスフェクトされた細胞株を作成するには、細胞株のゲノムに外来 DNA を組み込む必要があります。 ただし、安定した遺伝は非ゲノム DNA でも観察できます。安定したトランスフェクションを成功させるには、効果的な DNA 送達方法と、細胞株内の外来 DNA の選択方法が必要です。安定的にトランスフェクトされた細胞株は、組換えタンパク質の生産、遺伝子機能研究、創薬アッセイなど、幅広い用途に使用されています。
対象となる主な分野
1.安定したトランスフェクト細胞株の作り方
– 安定細胞株作製プロトコル
2.細胞株でトランスフェクトされた DNA を選択する方法
– 安定的にトランスフェクトされた細胞株の選択
重要な用語:エピソーム維持、ゲノムへの統合、プラスミド、選択、安定的にトランスフェクトされた細胞株
安定したトランスフェクト細胞株の作り方
トランスフェクションとは、化学的または非化学的な方法で意図的に宿主細胞に遺伝物質を導入する遺伝子導入の方法です。安定的にトランスフェクトされた細胞株には 2 種類あります:
<オール>
図 1:安定的にトランスフェクトされた細胞株
プロセス
安定した細胞株の生成に含まれる手順を以下に説明します。
<オール>細胞株でトランスフェクトされた DNA を選択する方法
選択マーカーは、トランスフェクトされた細胞を選択するために、トランスフェクトされた DNA と共発現します。マーカー遺伝子は、宿主細胞をトランスフェクトするために使用される同じベクター（cis）または別のベクター（trans）に存在する可能性があります。ネオマイシン、ゼオシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、DHFRなどの抗生物質に対する耐性を選択に使用できます。さらに、トランスフェクトされた遺伝子は GFP でタグ付けできます。
結論
安定した細胞株は、主にトランスフェクトされた DNA をゲノムに組み込むことによって作成できます。さらに、トランスフェクトされた DNA のエピソーム維持は、一部の宿主生物で長期間安定した細胞株を作成するためにも使用できます。細胞株にトランスフェクトされた DNA を同定するための選択方法が必要です。
参照:
1.「安定細胞株生成のプロトコル」。 クリエイティブ バイオマート 、ここから入手できます。
画像提供:
1.「ノックアウト マウス プロダクション 2」 Kjaergaard 作 – Commons Wikimedia による自身の作品（CC BY 3.0）
