主な違い 単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの違いは、単一制限酵素が単一消化プラスミドをもたらすのに対し、2 つの異なるタイプの制限酵素が二重消化プラスミドをもたらすことです。 さらに、外来 DNA 断片の挿入は、1 回消化されたプラスミドでは両方の方向で発生する可能性がありますが、2 回消化されたプラスミドでは、外来 DNA 断片の挿入は適切な方向でのみ発生します。
単一消化プラスミドと二重消化プラスミドは、組換え DNA 技術で組換え DNA を生成するために使用される 2 種類のプラスミドです。
対象となる主な分野
1.単一消化プラスミドとは
– 定義、セルフライゲーション、オリエンテーション
2.二重消化プラスミドとは
– 定義、二重消化、向き
3.単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの類似点
– 共通機能の概要
4.単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
二重消化プラスミド、二重消化、配向、組換えプラスミド、単一消化プラスミド、単一消化
単一消化プラスミドとは
単一消化プラスミドは、単一の制限酵素でのみ消化されるタイプのプラスミドです。したがって、このプロセスは単一消化と呼ばれます。一般に、組換え DNA 技術で使用されるプラスミドには、特定の制限酵素に対する制限部位が 1 つしか含まれていません。したがって、1 回の消化で環状プラスミドが直線状になり、1 つの DNA 断片が得られます。この DNA フラグメントの 2 つの末端は互いに互換性があります。したがって、それらは、その後のインサートとのライゲーション中にセルフライゲーションを受ける可能性があります。
図 1:単一消化プラスミド
ここで、インサートも同じ制限酵素で消化して、プラスミドと適合する末端を生成する必要があります。したがって、ライゲーションは、5' から 3' の方向と 3' から 5' の方向の 2 つの方向で起こります。ただし、プロモーター領域と同じ向きの挿入は転写を受ける可能性があります。したがって、この向きは適切な向きとして知られています。続行する前に、PCR または生化学的アッセイのいずれかによって、形質転換されたコロニーをスクリーニングして、適切な向きの組換えプラスミドを選択する必要があります。
二重消化プラスミドとは
二重消化プラスミドは、2 つの制限酵素による二重消化を受けるプラスミドです。ここで、この反応は単一のチューブ内で行うことができる。両方の消化の制限部位は、プラスミドの制限認識部位内にあります。したがって、二重消化反応でも 1 つの DNA 断片が生成されます。しかし、2 つの末端のそれぞれは、異なる制限酵素によって生成されます。したがって、これらの末端は互いに適合せず、セルフライゲーションを受けません。
図 2:二重消化プラスミド
最も重要なことは、インサートの末端を消化して適切な方向にライゲーションすることにより、インサートを二重消化プラスミドと適切な方向にライゲーションできることです。したがって、二重消化されたプラスミドは、適切な向きの組換えプラスミドのみを生成し、その後の向きの選択が不要になります。これにより、組換え DNA 製造手順の完全なステップが削減されるため、時間を節約できます。
単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの類似点
- 一重消化プラスミドと二重消化プラスミドは、組換え DNA 技術で使用される 2 種類のプラスミドです。
- シングルステップの反応で、シングル消化とダブル消化の両方を行うことができます。
- また、どちらの場合も、消化されたプラスミドの 2 つの末端の間に外来 DNA フラグメントが挿入されます。
- さらに、プラスミドの 1 回消化と 2 回消化の両方で 1 つの DNA 断片が生成されますが、組換えプラスミドを消化すると 2 つの DNA 断片が生成されます。
単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの違い
定義
単一消化プラスミドとは、単一の制限酵素によって消化されたプラスミドを指し、二重消化プラスミドとは、2 つの異なる制限酵素によって消化されたプラスミドを指します。これらの定義は、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な違いを説明しています。
終了
単一消化プラスミドでは、同じ制限酵素で消化すると両端が生成されますが、二重消化プラスミドでは、異なる制限酵素で消化すると両端が生成されます。したがって、これは単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの重要な主な違いです。
自己結紮
さらに、セルフライゲーションは、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な主な違いです。単一消化されたプラスミドの末端はセルフライゲーションのために互いに互換性がありますが、二重消化されたプラスミドの末端はセルフライゲーションのために互いに互換性がありません.
重要性
さらに、外来 DNA 断片の挿入は、単一消化プラスミドでは両方の方向で発生する可能性がありますが、二重消化プラスミドでは適切な方向で外来 DNA 断片の挿入を行うことができます。
組換えプラスミドの種類
単一消化されたプラスミドは、3 種類のプラスミドを生成することができます:逆向きの 2 つの組換えプラスミドと、インサートのないセルフライゲーション プラスミドです。一方、二重消化されたプラスミドは、適切な方向にある 1 種類の組換えプラスミドしか生成できません。したがって、これは単一消化プラスミドと二重消化プラスミドのもう 1 つの主な違いです。
時間の節約
単一消化プラスミドの組換えフラグメントは、適切な向きに選択する必要がありますが、二重消化プラスミドは外来 DNA フラグメントの適切な向きを保証します。したがって、二重消化されたプラスミドは、単一消化されたプラスミドではなく、組換え DNA 技術で時間を節約します。
結論
単一消化されたプラスミドは、単一の制限酵素で消化され、セルフライゲーションと適合する末端になります。さらに、外来DNAフラグメントとのライゲーションは、両方の方向で発生する可能性があります。したがって、適切な向きの組換えプラスミドを選択する必要があります。一方、二重消化プラスミドは、2 つの異なる制限酵素で消化されます。したがって、両端はセルフライゲーションには適合しません。さらに、外来DNA断片は、二重消化されたプラスミドで適切な方向に連結することができます。したがって、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な違いは、消化の種類とインサートの方向です。
参照:
1. グリフィス AJF、ミラー JH、スズキ DT など遺伝子解析入門。第7版。ニューヨーク：W.H.フリーマン。 2000. 組換え DNA の作成。ここで利用可能
