主な違い 間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の違いは、間接 ELISA では、検出するタンパク質を含むサンプルでマイクロタイター プレートがコーティングされているのに対し、サンドイッチ ELISA ではこのプレートが一次抗体でコーティングされていることです。 .さらに、サンドイッチ ELISA は、間接 ELISA よりも 2 ～ 5 倍感度の高い方法です。
間接 ELISA とサンドイッチ ELISA は、固相酵素免疫測定法 (EIA) である ELISA (酵素結合免疫吸着測定法) の 2 つの方法です。これらは比較的感度の高い方法であり、高速で再現性もあります。
対象となる主な分野
1.間接ELISAとは
– 定義、手順、重要性
2.サンドイッチELISAとは
– 定義、手順、重要性
3.間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の類似点は何ですか
– 共通機能の概要
4.間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
ELISA、酵素結合二次抗体、間接 ELISA、一次抗体、サンドイッチ ELISA、感度
間接 ELISA とは
間接 ELISA は 2 段階 ELISA の一種で、2 種類の抗体を使用してサンプル中の特定のタンパク質を検出および定量します。間接 ELISA の手順は次のとおりです。
- マイクロタイター プレートの表面をサンプルでコーティングする
- 結合していないタンパク質をプレートから除去するための洗浄
- タンパク質でコーティングされたマイクロタイター プレートと一次抗体のインキュベーション
- 結合していない抗体をプレートから除去するための洗浄
- マイクロタイター プレートと酵素結合二次抗体のインキュベーション
- 結合していない抗体をプレートから除去するための洗浄
- 酵素反応に必要な対応する発色基質の追加;
- プレートから生成されたシグナルの検出。
図 1:間接 ELISA
一般に、間接 ELISA は、病原性抗原に対して体内で産生される抗体を定量化することにより、細菌、ウイルス、または寄生虫感染を診断する優れた方法です。ここでは、ポリクローナル抗体を間接 ELISA の二次抗体として使用できます。したがって、より経済的です。一方、異なる数の一次抗体の異なるタイプを使用して、標的タンパク質と結合させることができます。したがって、間接 ELISA は、標的タンパク質を検出するためのそれぞれより柔軟で感度の高い方法です。
サンドイッチ ELISA とは
サンドイッチ ELISA はもう 1 つのタイプの 2 ステップ ELISA で、検出に一次抗体と酵素結合二次抗体の両方を使用します。サンドイッチ ELISA の主な特徴は、目的のタンパク質を一次抗体と二次抗体の間に挟むことです。サンドイッチ ELISA の手順は次のとおりです。
- マイクロタイター プレートの表面を一次抗体でコーティングする
- 結合していない一次抗体をプレートから除去するための洗浄
- マイクロタイター プレートとサンプルのインキュベーション
- 結合していないタンパク質をプレートから除去するための洗浄
- マイクロタイター プレートと酵素結合二次抗体のインキュベーション
- 結合していない二次抗体をプレートから除去するための洗浄;
- 酵素反応に必要な対応する発色基質の追加;
- プレートから生成されたシグナルの検出。
図 2:サンドイッチ ELISA
重要なことに、サンドイッチ ELISA は低分子量から高分子量のタンパク質を検出するのに適しています。また、直接または間接 ELISA よりも感度が高くなります (2 ～ 5 倍)。さらに、サンドイッチ ELISA は、2 つの抗体を使用して標的タンパク質を捕捉するため、より特異的な手法です。
間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の類似点
- 間接 ELISA とサンドイッチ ELISA は、生体サンプル中のタンパク質の検出と定量に役立つ 2 種類の ELISA 方法です。
- どちらのタイプの ELISA 法も、2 段階の方法で構成されています。
- さらに、抗原、抗体、ホルモンなどの特定のタンパク質を検出するために、一次抗体と酵素結合二次抗体の両方を使用します。
- また、これら 2 種類のアッセイには 2 種類の抗体が関与しているため、特異性が高くなります。
- さらに、どちらの方法も高感度でハイスループットな方法です。より迅速で再現性の高いアッセイです。
間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の違い
定義
間接 ELISA は、一次抗体と標識二次抗体の 2 つの結合プロセスを含む 2 ステップ ELISA を指し、サンドイッチ ELISA は別の 2 ステップ ELISA タイプを指します。関心は、一次抗体と二次抗体の間に挟まれています。したがって、これが間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の主な違いです。
マイクロタイタープレートのコーティング
間接 ELISA では、マイクロタイター プレートのコーティングはタンパク質を含むサンプルですが、サンドイッチ ELISA では、コーティングは一次抗体です。
二次抗体の結合
間接 ELISA では二次抗体が一次抗体に結合し、サンドイッチ ELISA では二次抗体が目的のタンパク質に結合します。
感度
間接 ELISA とサンドイッチ ELISA のもう 1 つの違いは、間接 ELISA は感度の高い方法であるのに対し、サンドイッチ ELISA は間接 ELISA よりも 2 ～ 5 倍感度が高いことです。
アプリケーション
サンプル中の総抗体濃度の決定には間接 ELISA が適していますが、複雑なサンプルの分析にはサンドイッチ ELISA が適しています。したがって、これが間接 ELISA とサンドイッチ ELISA のもう 1 つの違いです。
結論
間接 ELISA は 2 段階 ELISA の一種で、マイクロタイター プレート上の目的のタンパク質に一次抗体を結合させた後、酵素で検出します。リンクされた二次抗体。一方、サンドイッチ ELISA はもう 1 つのタイプの 2 ステップ ELISA であり、目的のタンパク質と一次抗体の結合に関与し、マイクロタイター プレートをコーティングした後、酵素結合二次抗体で検出します。したがって、間接 ELISA とサンドイッチ ELISA の主な違いは手順の順序です。
