主な違い 温トリプシン処理と冷トリプシン処理の違いは、温トリプシン処理が 36.50 °C の温トリプシンによる組織のインキュベーションに関与しているのに対し、冷トリプシン処理は 4 °C の冷トリプシンへの組織の浸漬とそれに続く 36.50 °C でのインキュベーションに関与しているということです。 C .さらに、温トリプシン処理では細胞への損傷が大きくなりますが、冷トリプシン処理では組織に対する温トリプシンの長期的な影響が最小限に抑えられます。
温トリプシン処理と冷トリプシン処理は、初代細胞培養で使用される組織の酵素分解法であるトリプシン処理の 2 つの手法です。ここで、トリプシンは、培養中の細胞の接着に関与するタンパク質を分解するタンパク質分解酵素です.
対象となる主な分野
1.加温トリプシン処理とは
– 定義、方法、重要性
2.コールド トリプシン処理とは
– 定義、方法、重要性
3.温かいトリプシン処理と冷たいトリプシン処理の類似点
– 共通機能の概要
4.温トリプシン処理と冷トリプシン処理の違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
タンパク質の付着、コールド トリプシン処理、酵素分解、初代細胞培養、トリプシン、ウォーム トリプシン処理
Warm Trypsinization とは
温トリプシン処理は、初代細胞培養の準備中に組織の酵素分解に使用される 2 種類のトリプシン処理法の 1 つです。分解には 36.50 °C の温かいトリプシンを直接使用します。まず、みじん切りにした組織を DBSS (解剖基礎塩溶液) で洗浄し、温かいトリプシンを入れたフラスコに加えます。解離した細胞は上清中にあり、解離した細胞を回収するために30分ごとにフラスコの内容物を攪拌する。その後、新鮮なトリプシンが混合物に追加されます。そして、解離した細胞を回収しながら、この手順を3〜4時間続けることができます。最後に、遠心分離によって混合物からトリプシンを除去できます。
図 1:加温トリプシン処理
さらに、加温トリプシン処理は加温トリプシンを直接使用するため、最も効果的な細胞回収方法です。また、この手順は数時間以内に完了することができます。ただし、温かいトリプシンの悪影響により、生細胞の収量は少なくなります。
Cold Trypsinization とは
コールド トリプシン処理は、トリプシン処理の 2 番目の方法です。効果は劣りますが、大量の生細胞が得られます。コールド トリプシン処理の欠点の 1 つは、手順の完了にかかる時間です。一般に、準備された組織は、最初に 4 °C の冷トリプシンに約 6 ～ 24 時間浸します。その後、回収した組織を残留トリプシンとともに 36.50 °C で 20 ～ 30 分間インキュベートします。ピペッティングを繰り返すと、分離した細胞を分散させるのに役立ちます。
図 2:低温トリプシン処理
しかし、前述のように、この方法では、温かいトリプシンに長時間さらされることによる細胞の損傷のリスクは最小限です。したがって、このメソッドは、培養中の改善された細胞生存率を示しています。また、遠心分離がないため、この方法は従来の実験室に適しています。それにもかかわらず、この方法の主な欠点は、一度に大量の組織に使用できないことです.
温トリプシン処理と低温トリプシン処理の類似点
- 加熱トリプシン処理と冷却トリプシン処理は、トリプシン処理の 2 つの手法であり、トリプシンを使用して細胞培養における接着タンパク質の酵素分解を行います。
- 初代細胞培養用の組織を準備する際に、両方の方法を使用できます。
- さらに、どちらの方法もある時点で 36.50 °C の温かいトリプシンを使用します。
- さらに、細胞を分離するのにも役立ちます。
ウォーム トリプシン処理とコールド トリプシン処理の違い
定義
温トリプシン処理とは、36.50 °C でトリプシンを使用して組織をインキュベートした後、遠心分離によってトリプシンを除去する 2 つのトリプシン処理方法のうちの 1 つを指し、冷トリプシン処理とは、 36.50 ° C でトリプシンとのインキュベーションに続いて 4 ° C でトリプシンに浸漬に関与するトリプシン処理の他の方法。したがって、これが温トリプシン処理と冷トリプシン処理の主な違いです。
温かいトリプシン (36.50 °C) の使用
温トリプシン処理と冷トリプシン処理のもう 1 つの大きな違いは、温トリプシン処理では組織を温トリプシンで 3～4 時間処理し、組織を温トリプシンで 20 時間インキュベートすることです。 30分。
遠心分離
遠心分離は、温トリプシン処理と冷トリプシン処理のもう 1 つの違いです。サンプルからトリプシンを除去するために、温トリプシン処理では遠心分離が不可欠ですが、冷トリプシン処理では遠心分離は必要ありません。
有効性
また、温かいトリプシン処理はより効果的ですが、冷たいトリプシン処理は効果が低くなります.
重要性
さらに、それらの重要性は、温トリプシン処理と冷トリプシン処理のもう 1 つの違いです。温トリプシン処理は組織内の細胞に損傷を与える可能性がありますが、温トリプシン処理の悪影響は冷トリプシン処理で取り除かれます.
生細胞の収量
生細胞の収量は、加熱トリプシン処理と冷却トリプシン処理のもう 1 つの違いです。常温トリプシン処理では生存細胞の量が少なくなりますが、低温トリプシン処理では生存細胞の収率が高くなります。
時間
さらに、温かいトリプシン処理では手順を完了するのに時間がかかりませんが、冷たいトリプシン処理では時間がかかります.
アプリケーション
さらに、細胞外マトリックスと線維性結合組織を含む組織には温トリプシン処理が使用され、胚器官などの軟組織には冷トリプシン処理が使用されます。
結論
温トリプシン処理はトリプシン処理の方法で、36.50 °C の温トリプシンを使用して組織を処理し、接着タンパク質を分解します。これは組織の酵素分解の効果的な方法ですが、温かいトリプシンの悪影響により、生細胞の量が少なくなります。比較すると、冷たいトリプシン処理はトリプシン処理の 2 番目の方法であり、温かいトリプシンでインキュベーションする前に、組織を 4 ° C の冷たいトリプシンに浸します。この方法はあまり効果的ではありませんが、多数の生存細胞が得られます。したがって、温トリプシン処理と冷トリプシン処理の主な違いは、温トリプシンの使用法と各方法の重要性です。
