動物細胞培養の成長のパラメーター:
動物細胞培養は複雑で繊細なプロセスであり、最適な成長のためにいくつかのパラメーターを慎重に制御する必要があります。これらは、次のように広く分類できます。
1。物理パラメーター:
* 温度: ほとんどの哺乳類細胞株は37°Cで繁栄します。これは、最適な酵素活性と細胞プロセスに不可欠です。
* ph: 細胞には、通常7.2〜7.4の間のわずかにアルカリ性環境が必要です。これは、メディア内のバッファーを使用して維持されます。
* 湿度: 蒸発を防ぎ、正しい媒体量を維持するには、高湿度(通常は約95%)が不可欠です。
* ガス組成: 細胞は呼吸のために酸素とpHを維持するためにCO2を必要とします。これは通常、5%CO2の加湿インキュベーターにインキュベートする細胞によって提供されます。
* 表面積: 細胞は、付着と成長のために十分な表面積を必要とします。これは、フラスコ、マルチウェルプレート、マイクロキャリアなどのさまざまな方法で達成されます。
2。メディア構成:
* 基本栄養素: 培地には、細胞の成長と代謝をサポートするために、アミノ酸、ビタミン、グルコース、塩などの必須栄養素を含める必要があります。
* 成長因子: 一部の細胞タイプには、増殖を刺激するために、インスリンや表皮成長因子(EGF)などの特定の成長因子が必要です。
* 血清: 多くの場合、血清は媒体に追加され、必須の栄養素と成長因子、および付着と保護のためのタンパク質を提供します。ただし、血清は複雑で未定義の混合物であり、変動性と潜在的な汚染物質を導入できます。
* バッファ: 重炭酸塩やHEPESなどのバッファーは、pHの安定性を維持するために使用されます。
* 抗生物質: 抗生物質は細菌の汚染を防ぐために添加されることがありますが、細胞の成長にも影響を与える可能性があり、注意して使用する必要があります。
* 他の添加物: 細胞株と応用に応じて、キレート剤や抗酸化剤など、他の添加物が必要になる場合があります。
3。 細胞株固有の因子:
* 通過番号: 細胞には有限の寿命があり、その成長特性は通過数の増加とともに変化します。
* サブカルチャー頻度: 細胞を分割する頻度(サブカルチャリング)は、細胞株とその成長率に依存します。
* シード密度: 培養容器に播種された細胞の初期数は、成長と細胞の形態に影響します。
* 応力因子: 細胞は、過密、栄養枯渇、またはpH変動などの要因によってストレスを感じる可能性があり、それが成長に悪影響を与える可能性があります。
4。 無菌技術:
* 不妊: 無菌環境を維持することは、細菌、菌類、またはウイルスからの汚染を防ぐために重要です。これには、滅菌機器と手順の使用が含まれます。
* 汚染防止: 汚染の定期的な監視と適切な滅菌技術の使用は、細胞培養を成功させるために不可欠です。
5。 機器:
* インキュベーター: 正しい温度とガスの組成を維持する加湿インキュベーター。
* 細胞培養フード: 層流フードは、セルを処理するための滅菌環境を提供します。
* 顕微鏡: 顕微鏡は、細胞の形態を視覚化し、成長を評価するために不可欠です。
* ピペットと滅菌容器: これらは、細胞培養培地と細胞の取り扱いと転送に必要です。
これらすべてのパラメーターを慎重に制御することにより、動物細胞培養に最適な環境を作成し、効率的な成長と成功した実験を可能にすることができます。ただし、各細胞株には独自の要件と感度があることを忘れないでください。最適な成長のために、さらなる最適化と特殊なプロトコルが必要です。