大腸菌の内膜タンパク質と外膜タンパク質
内膜タンパク質（IMPS） ：これらのタンパク質は、細胞質を囲むリン脂質二重層である大腸菌の内膜に埋め込まれています。彼らは、以下を含む、さまざまな細胞機能で重要な役割を果たします。
* 輸送： 膜全体の栄養素、イオン、廃棄物の動きを促進します。
* 信号変換： 環境からセルの内部への信号を中継します。
* エネルギー代謝： 電子輸送やATP合成などのプロセスへの参加。
外膜タンパク質（OMPS） ：これらのタンパク質は、内膜を囲み、構造的なサポートと保護を提供する2番目のリン脂質二重層である大腸菌の外膜にあります。彼らは関与しています：
* ポリン形成： 小分子の通過を可能にするチャネルを作成します。
* 受容体活性： 特定の分子に結合し、細胞応答をトリガーします。
* 接着： 表面または他のセルに付着します。
内膜と外膜タンパク質を大腸菌
から分離します
これらのタンパク質タイプを大腸菌から分離するための一般的なアプローチは次のとおりです。
1。細胞溶解：
* 機械的溶解： 超音波処理やフランスのプレスなどの方法を使用して、細胞壁を破壊し、細胞の内容を放出します。
* 化学溶解： Triton X-100やSDSなどの洗剤を利用して、膜脂質を溶解します。
2。微分遠心分離：
* 低速遠心分離（10,000 x g）： このステップは、壊れていない細胞や大きな細胞成分を含む細胞の破片を除去します。
* 高速遠心分離（100,000 x g）： このステップは、内膜と外膜を可溶性細胞質から分離します。両方の膜を含むペレットが収集されます。
3。膜分画：
* スクロース勾配遠心分離： この方法は、密度に基づいて膜を分離します。外膜は通常、内膜よりも密度が低く、その分離を可能にします。
* Triton X-114位相分割： この手法は、非イオン性洗剤を使用して、疎水性に基づいてタンパク質を分離します。 IMPはOMPよりも疎水性であり、洗剤が豊富な相に分割されます。
4。浄化：
* アフィニティクロマトグラフィー： この手法は、標的タンパク質に結合する特定のリガンドを利用して、他のタンパク質からの分離を可能にします。
* イオン交換クロマトグラフィ： この方法は、その電荷に基づいてタンパク質を分離します。
* サイズ除外クロマトグラフィ： この手法は、そのサイズに基づいてタンパク質を分離します。
5。確認：
* sds-page： この電気泳動技術は、分子量に基づいてタンパク質を分離します。
* ウエスタンブロッティング： この技術は、抗体を使用して特定のタンパク質を検出します。
重要なメモ：
*特定のプロトコルは、ターゲットタンパク質とその特性に依存します。
*各ステップの最適化は、純粋で機能的なタンパク質を取得するために重要です。
*質量分析などの手法を使用して、分離されたタンパク質画分のさらなる分析に使用できます。
コマーシャルキット：
いくつかの市販のキットは、プロセスを簡素化できる大腸菌内および外膜タンパク質を分離するために利用できます。
これらの手順に従って適切な手法を選択することにより、研究者は内側と外膜タンパク質を大腸菌から浄化し、精製し、それらの構造、機能、および相互作用のさらなる分析を可能にすることができます。
