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DNAを配列するとき、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸とは何ですか?

ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸(DDNTP)は、特にサンガーシーケンスのDNAシーケンスの過程で重要な成分です 方法。その理由は次のとおりです。

ddntpとは

* 構造: DDNTPは、DNAの構成要素である通常のデオキシリボヌクレオシド三リン酸(DNTP)の修正バージョンです。違いは、デオキシリボース糖の3 'ヒドロキシル基にあります。 DDNTPでは、このヒドロキシル基は水素原子に置き換えられます。

* 関数: 一見小さな変化は大きな影響を与えます。 3 'ヒドロキシル基は、DNAポリメラーゼが鎖の次のヌクレオチドを加えるために不可欠です。それがなければ、DNAポリメラーゼはホスホジエステル結合を作成できず、鎖は終了します。

シーケンスでDDNTPがどのように使用されるか:

1。 DNA複製: シーケンス反応は、テンプレートDNA鎖とプライマーから始まります。

2。 ddntpの取り込み: DNAポリメラーゼは、成長する鎖にDNTPを追加し、テンプレートストランドをコピーします。ただし、反応には少量のdDNTPも含まれており、基部(a、c、g、またはt)に応じて異なる蛍光色素で特異的に標識されています。

3。チェーン終了: DDNTPが成長鎖に組み込まれると、DNAポリメラーゼが別のヌクレオチドを加えることができないため、鎖が終了します。これにより、さまざまな長さの一連のDNAフラグメントが作成され、それぞれが特定のDDNTPで終わります。

4。分離と検出: 次に、断片は電気泳動を使用してサイズによって分離され、より短いフラグメントはゲルを介してより速く移動します。フラグメントが検出器を通過すると、各フラグメントの端にあるDDNTPに付着した蛍光色素が識別され、DNAの配列が明らかになります。

要約:

* DDNTPは、サンガーシーケンスのチェーンターミネーターであり、DNA複製中に「停止点」として機能します。

*それらは、それらが表す塩基を識別するために蛍光色素で標識されています。

*これにより、科学者は終端したフラグメントの異なる長さを分析することにより、DNAのシーケンスを読み取ることができます。

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