1。細菌の準備：
*細菌は、特定の成長段階（通常は対数段階）に達するまで、栄養豊富な培地で成長します。
*その後、細胞を塩化カルシウム（CACL2）で処理します 。この処理により、細菌細胞膜の透過性が高まり、DNA摂取の可能性が高まります。
2。プラスミドの導入：
*組換えプラスミドDNAを処理した細菌と混合します。
*この混合物は、熱ショックにさらされます （通常、短時間42°C）。この熱ショックは、膜透過性をさらに増加させ、プラスミドが細菌細胞に入ることを可能にします。
3。形質転換された細菌の選択：
*すべての細菌がプラスミドDNAを吸収するわけではありません。形質転換された細菌を識別するために、プラスミドには選択可能なマーカー遺伝子が含まれています 。この遺伝子は通常、抗生物質耐性を付与します。
*細菌は、対応する抗生物質を含む成長媒体に播種されています。プラスミドを取り上げ、抗生物質耐性遺伝子を発現した細菌のみが成長することができます。
4。プラスミド統合の確認：
*バクテリアが組換えプラスミドの統合に成功したことを確認するために、通常、さらなる分析が行われます。これには次のことが含まれます。
* pcr： プラスミドから特定の遺伝子断片を増幅して、その存在を確認します。
* 制限酵素消化： 特定の酵素でプラスミドDNAを切断して、目的の遺伝子インサートの存在を確認します。
* シーケンス： プラスミドDNAの配列を決定して、遺伝子の正しい挿入を検証します。
全体として、変換は組換えプラスミドを細菌に導入するための非常に効率的な方法です。形質転換された細菌を選択し、プラスミドの存在を確認することにより、研究者は望ましい遺伝子修飾が成功裏に達成されたことを確認できます。
注： エレクトロポレーションなど、DNAを細菌に導入する他の方法があります 、電気パルスを使用して細胞膜に細孔を作り、変換 、ウイルスを利用してDNAを運ぶ。ただし、変換は、そのシンプルさと有効性のために、最も広く使用されている技術のままです。
