直接ELISAと間接ELISAの違いは何ですか

主な違い 直接 ELISA と間接 ELISA の違いは、直接 ELISA では一次抗体が検出酵素に直接結合しているのに対し、間接 ELISA では一次抗体に相補的な二次抗体が検出酵素に結合しています。> これは、直接 ELISA が単一の抗体を使用するのに対し、間接 ELISA は 2 つの抗体を使用することを意味します。

直接および間接 ELISA は、媒体中の特定の抗原または抗体の存在を検出するために使用される ELISA (酵素免疫測定法) の 2 つの方法です。

対象となる主な分野

1.ダイレクト ELISA とは
– 定義、手順、特性
2.間接ELISAとは
– 定義、手順、特性
3.直接ELISAと間接ELISAの類似点
– 共通機能の概要
4.直接 ELISA と間接 ELISA の違いは何ですか
– 主な相違点の比較

主な用語

直接 ELISA、検出酵素、間接 ELISA、一次抗体、二次抗体、基質

ダイレクト ELISA とは

直接 ELISA は、酵素結合した一次抗体自体で抗原を検出できる ELISA の方法です。この ELISA メソッドは、最初に Perlmann と Engvall によって開発されました。これは、ELISA の最も単純な形式と考えられています。直接 ELISA の手順は次のとおりです。

ここで、一次抗体に結合する主な 2 種類の酵素は、HRP (ホースラディッシュ ペルオキシダーゼ) とアルカリホスファターゼです。 HRP と共に使用される 3 種類の基質は、OPD (o-フェニレンジアミン二塩酸塩)、TMB (3, 3', 5, 5'-テトラメチルベンジジン)、および ABTS (2, 2'-アジノビス [3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸]-ジアンモニウム塩)。アルカリホスファターゼと共に使用される基質は、PNPP (リン酸 p-ニトロフェニル、二ナトリウム塩) です。基質に対する酵素反応は、培地の色の変化を引き起こします。これは、基質の種類と反応に使用される酵素によって異なります。これにより、標的抗原を含むサンプルの検出が容易になります。

図 1:直接 ELISA

サンプル中の高分子量抗原の検出には、直接 ELISA の方が適しています。この ELISA 法ではステップ数が少ないため、アッセイが高速になります。しかし、一次抗体を酵素で標識するにはコストと時間がかかるため、直接 ELISA を使用することはほとんどありません。一方で、標的抗原にも悪影響を及ぼします。

間接 ELISA とは

間接 ELISA は、一次抗体と二次抗体の 2 つの抗体を検出に使用する ELISA の別の方法です。間接 ELISA の手順は次のとおりです。

プレートから生成されたシグナルの検出。

図 2:間接 ELISA

間接 ELISA は、2 つの抗体結合ステップを経ます。一方、二次抗体には検出酵素が結合しています。一般に、酵素が結合した二次抗体はたくさんあります。ここで、二次抗体は主にポリクローナル抗種抗体です。酵素結合抗体が利用できるため、間接 ELISA 法は、寄生虫、細菌、およびウイルスの検出における免疫学的アッセイでより頻繁に使用されます。一方、いくつかの二次抗体は、プレート内の一次抗体に結合することができます。したがって、アッセイの感度は非常に高いです。

直接 ELISA と間接 ELISA の類似点

• 直接および間接 ELISA は、目的の抗原をプレートに直接付着させる ELISA の 2 つの方法です。
• どちらの方法も、サンプル中の特定のタンパク質分子の存在の検出に関与します。このタンパク質分子はプレートに直接付着しています。
• どちらの方法でも、96 ウェル プレートまたは 8 ウェル ストリップ チューブが使用されます。これらのプレートとチューブはどちらもポリスチレンでできています。 96 ウェル プレートは、反応に最適な希釈を決定するための十分なスペースを提供します。一方、微調整されたアッセイには 8 ウェル ストリップ チューブの方が適しています。

直接 ELISA と間接 ELISA の違い

定義

直接 ELISA は、一次抗体が検出酵素と結合している ELISA のタイプを指し、間接 ELISA は、二次抗体が検出酵素と結合している ELISA のタイプを指します。検出酵素.

使用した抗体の数

直接 ELISA は 1 つの抗体を使用しますが、これは一次抗体であり、間接 ELISA は一次抗体と二次抗体の 2 つの抗体を使用します。これが、直接 ELISA と間接 ELISA の主な違いです。

検出酵素がリンクされています

さらに、直接 ELISA では検出酵素が一次抗体に結合され、間接 ELISA では検出酵素が二次抗体に結合されます。

信号強度

直接 ELISA と間接 ELISA のもう 1 つの違いは、直接 ELISA で生成されるシグナルは強度が低く、間接 ELISA で生成されるシグナルはシグナル増幅のために強度が高いことです。

バックグラウンド シグナル

ただし、直接 ELISA は間接 ELISA よりも多くのバックグラウンド シグナルを生成します。

感度

直接 ELISA は感度が低く、間接 ELISA は感度が高くなります。これは、直接 ELISA と間接 ELISA の違いでもあります。

交差反応性

直接 ELISA と間接 ELISA のもう 1 つの違いは、交差反応性です。つまり、交差反応性は直接 ELISA では最小ですが、間接 ELISA では有意です。

時間

さらに、直接 ELISA はステップが少ないため時間がかかりませんが、間接 ELISA は抗体結合ステップが 2 倍になるため時間がかかります。

使用頻度

直接 ELISA は比較的まれですが、間接 ELISA はより一般的です。

結論

直接 ELISA は、特定の抗原の検出に一次抗体のみを使用します。これは、一次抗体が直接 ELISA で検出酵素と結合していることを意味します。しかし、間接 ELISA では一次抗体を使用して抗原に結合し、酵素結合二次抗体は一次抗体に結合します。直接 ELISA は、酵素結合一次抗体が入手しにくいため、あまり一般的ではありません。直接 ELISA と間接 ELISA の主な違いは、使用する抗体の数です。

参照:

1.「ELISAの種類」。 バイオ・ラッド 、Bio-Rad Laboratories、こちらから入手可能

画像提供:

1. Cavitri による「ELISA ダイアグラム」 – Commons Wikimedia による自作 (CC BY 3.0)
2. Cawangによる「間接ELISA」–コモンズウィキメディア経由の自作（CC0）