顕微鏡の拡大が増加すると、観測されたオブジェクトの明るさが減少します。これは、光がより大きな領域に広がっているため、調光像になるためです。さらに、倍率が高いほど、反射、吸収、散乱により光が失われる可能性が高くなり、画像の明るさがさらに低下します。