アンチコドン配列に加えて、tRNA分子の全体的な構造は、mRNAに結合できるかどうかを判断する役割も果たします。 tRNA分子は、アンチコドンをmRNAに露出してアクセスできるようにする特定の形状に折りたたむことができなければなりません。この形状は、tRNA分子の異なる塩基間の相互作用と、tRNA分子と他のタンパク質間の相互作用によって決定されます。
最後に、tRNA分子のmRNAへの結合は、マグネシウムイオンやGTPなどの他の分子の存在によっても影響を受けます。これらの分子は、tRNAとmRNAの間の相互作用を安定化するのに役立ち、また、正しいtRNA分子がmRNAに結合していることを保証するのにも役立ちます。