シングルセルクローンを取得する方法
1。希釈クローニング（限定希釈）
- 原則： 細胞懸濁液を、個々の細胞を分離し、個々の井戸または斑点に播種するほど十分な濃度に細胞懸濁液を希釈します。
- 手順：
- 1。準備： 血球計または細胞カウンターを使用して、培養のおおよその細胞濃度を決定します。
- 2。希釈： 目的の細胞密度を達成するために必要な希釈係数を計算します（たとえば、ウェルごとに1細胞）。 それに応じて細胞懸濁液を希釈します。
- 3。メッキ： 希釈した細胞をマルチウェルプレート（96ウェル、24ウェルなど）またはペトリ皿にプレートします。
- 4。インキュベーション： 細胞が成長し、コロニーを形成します。
- 5。選択： 単一のコロニーのある井戸または地域を特定します（1つの細胞がコロニー全体を生み出しました）。
2。微小操作（顕微鏡選択）
- 原則： 顕微鏡とマイクロマニピュレーターを使用して、単一の細胞を物理的に拾い上げ、新しい成長媒体に移します。
- 手順：
- 1。準備： マイクロマニピュレーターで顕微鏡を使用します。
- 2。セルの選択： 顕微鏡下で関心のある単一の細胞を特定します。
- 3。分離： マイクロマニピュレーターを慎重に使用してセルを拾います。
- 4。転送： 細胞を新しい成長媒体に移します（たとえば、小さな培養皿やマイクロチューブ）。
- 5。インキュベーション： セルがコロニーに成長するようにします。
3。フローサイトメトリーベースのソート
- 原則： フローサイトメーターを使用して、特定の特性（サイズ、蛍光など）に基づいて細胞を並べ替えます。
- 手順：
- 1。ラベル： 必要に応じて、細胞を蛍光マーカーとラベル付けして、それらを他のものと区別します。
- 2。ソート： フローサイトメーターを介してセルサスペンションを実行します。機器は、指定されたパラメーターに基づいてセルを分析および分離します。
- 3。コレクション： 関心のある細胞を新しい成長媒体に収集します。
- 4。インキュベーション： 細胞がコロニーに成長するようにします。
シングルセルクローニングの考慮事項
* 細胞タイプ： 異なる細胞タイプには、異なる成長特性があります。一部は他のものよりも隔離に敏感です。
* 成長媒体： 培地の選択は、単一細胞の成長をサポートするために重要です。
* クローン純度： 選択したコロニーが単一の細胞に由来することを確認してください。
* 時間： 単一のセルがコロニーに増殖する必要があるため、クローニングには時間がかかる場合があります。
* アプリケーション：
- 細胞株の発達： 特定の特性を持つ純粋な細胞株の作成。
- 薬物スクリーニング： 個々の細胞に対する薬物効果のテスト。
- 遺伝的研究： 単一細胞レベルでの遺伝子発現と変異の研究。
これらの方法の詳細が必要な場合、または特定のアプリケーションについて質問がある場合はお知らせください！
