1。細胞溶解:
*細胞は開いており、DNAを含む内容物を放出します。
*これは、次のようなさまざまな方法を使用して実行できます。
* 洗剤: 細胞膜を破壊し、内容を放出します。
* 酵素: タンパク質を分解し、DNAの放出を可能にします。
* 機械的方法: 超音波処理やビーズの鼓動など、細胞を物理的に破壊します。
2。細胞破片の除去:
*細胞溶解の後、溶解物には細胞成分の混合物が含まれています。
* DNAを分離するには、タンパク質や脂質などの他の成分を除去する必要があります。これは、次のことを通じて達成できます。
* 遠心分離: 溶解物を高速で回転させると、密度に基づいてコンポーネントが分離されます。 DNAは通常、上清中です。
* 消化: プロテイナーゼKのような酵素はタンパク質を分解します。
* salting-out: 溶解物に塩を加えると、タンパク質を沈殿させますが、溶液中にDNAを残します。
3。 DNAの沈殿:
*その後、DNAは溶液から沈殿し、見えるようになります。これは通常、エタノールを使用して行われます またはイソプロパノール 。
*これらのアルコールは水よりも極性が少ないため、DNAが一緒に凝集し、目に見える沈殿物を形成します。
* 塩の追加 DNA分子の負の電荷を中和することにより、さらに降水を強化できます。
4。視覚化:
*次に、沈殿したDNAが収集されます。通常、ガラス棒の周りにスプールするか、ピペットを使用します。
* DNAは、白色、糸状質量として表示されます それは高度にコイル状と絡み合っているからです。
重要なポイント:
* DNA分離と視覚化のプロセスは、細胞型と意図したアプリケーションに基づいて最適化できます。
* 特定の実験要件に応じて、さまざまな手法と試薬が使用される場合があります。
* 視覚化は、臭化エチジウムのような染料を使用するなど、染色技術を使用して強化することもできます。
DNAの沈殿と視覚化のプロセスを理解することにより、さまざまなソースからDNAを効果的に分離および分析できます。