* 制限酵素: これらの酵素は分子はさみのように作用し、特定の配列でDNAを切断します。 それらは、プラスミドと目的の遺伝子に互換性のある端を作成するために重要です。
* リガーゼ: この酵素は分子接着剤のように作用し、プラスミドと遺伝子の切断端を結合し、組換えプラスミドを形成します。
プロセスを分解しましょう:
1。制限消化: プラスミドと目的の遺伝子は、同じ制限酵素で切断されます。これにより、互いにベースペアができる短い一本鎖のオーバーハングが互換性のある粘着性の端が作成されます。
2。ライゲーション: カットプラスミドと遺伝子は、リガーゼ酵素と混合されます。リガーゼは粘着性の端を結合し、新しい遺伝子を含む円形プラスミドを形成します。
その他の重要な酵素:
* DNAポリメラーゼ: この酵素は、特に制限ダイジェストが鈍い端を作成する場合(粘着性の張り出しなし)、DNAのギャップを埋めるために使用できます。
* アルカリホスファターゼ: この酵素は、プラスミドの自己ライゲーションを防ぐために使用できます。これは、プラスミドが1つの制限酵素のみで切断された場合に発生する可能性があります。
要約: 制限酵素とリガーゼの組み合わせは、新しい遺伝子をプラスミドに挿入する重要なプレーヤーです。他の酵素は、クローニングプロセスの特定の詳細に応じて使用できます。