1。加水分解とクロマトグラフィー:
* 手順:
* DNAは生物から抽出されます。
* DNAは、個々のヌクレオチド(アデニン、グアニン、シトシン、およびチミン)に加水分解(分解されます)。
*ヌクレオチドは、異なる化学的特性に基づいて、クロマトグラフィー(例:高速液体クロマトグラフィー、HPLC)を使用して分離されます。
*各ヌクレオチドの量は定量化され、通常は分光光度計を使用します。
* 利点: この方法は正確で信頼性が高く、各ベースに定量的なデータを提供します。
* 短所: これは、より時間がかかり、労働集約的なプロセスです。
2。分光光度測定:
* 手順:
* DNAは生物から抽出され、緩衝液に溶解します。
*溶液の吸光度は、分光光度計を使用して特定の波長で測定されます。
*次に、吸光度値を使用して、各ヌクレオチドの既知の絶滅係数を使用して各塩基の濃度を計算します。
* 利点: この方法は、クロマトグラフィーよりも速く、シンプルです。
* 短所: クロマトグラフィーよりも正確ではなく、計算は常に当てはまるとは限らない仮定に基づいています。
3。融解温度(TM)分析:
* 手順:
* DNAの融解温度(TM)は、DNA鎖の半分が変性されている温度(分離)です。
* TMはDNAの塩基組成の影響を受け、GC含有量が高いほどTMが高くなります。
* DNAサンプルのTMは、分光光度計を使用して測定されます。
* GC含有量は、測定されたTMに基づいて推定できます。
* 利点: この方法は比較的単純で、個々のベースを分離せずにGCコンテンツを推定するために使用できます。
* 短所: 正確なベース構成を決定する他の方法ほど正確ではありません。
4。ハイスループットシーケンス:
* 手順:
* DNAは、次世代シーケンステクノロジーを使用してシーケンスされます。
*次に、シーケンスデータを分析して、各ベースの頻度を決定します。
* 利点: この方法は非常に正確で、大量のDNAを分析でき、ゲノムの異なる領域にわたって塩基組成の変動を特定するために使用できます。
* 短所: この方法は高価であり、特殊な機器と専門知識が必要です。
5。 その他の方法:
* フローサイトメトリー: この方法は、特定の塩基に結合する蛍光色素を使用することにより、DNAの塩基組成を測定できます。
* 質量分析: この方法は、DNAの個々のヌクレオチドを識別および定量化し、塩基組成に関する詳細な情報を提供するために使用できます。
基本構成を測定するための最も適切な方法は、特定の研究の質問、利用可能なリソース、望ましいレベルの精度に依存します。