プロセスの理解
* 抽出: キサントフィルは、エタノールを使用してソース材料(植物の葉など)から抽出されます。
* 分光測光法: エタノール溶液中のキサントフィルの濃度は、分光光度計を使用して決定されます。キサントフィルは特定の波長で光を吸収し、吸収される光の量はその濃度に比例します。
方法
キサントフィル濃度を計算するための2つの一般的な方法を次に示します。
1。標準曲線の使用
* 標準ソリューションを準備: 純粋なキサントフィル標準を取得します。エタノールに既知の標準の重量を溶解して、既知の濃度のストック溶液を作成します。
* 標準曲線を作成します: ストック溶液を希釈して、既知の濃度の一連の溶液を作成します(例:10、20、30、40、50 µg/mL)。
* 測定吸光度: 分光光度計を使用して、Xanthophyll(通常は440〜450 nm前後)の最大吸光度波長で各標準溶液の吸光度を測定します。
* 標準曲線をプロットします: y軸の吸光度値と、x軸に対応する濃度をプロットします。これにより、吸光度と濃度の間に線形関係が生じます。
* 不明なサンプルを測定: 抽出されたキサントフィルサンプルを同じ波長で分光光度計を介して実行します。測定された吸光度に基づいて、標準曲線に対応する濃度を見つけます。
2。ビールランバート法の使用
* ビールランバート法: この法律では、吸光度(a)は、分析物の濃度(c)と溶液中の光ビームの経路長(L)に直接比例していると述べています。方程式は次のとおりです。a=εcl、ここで、εはモル吸収率(分析物に固有の一定)です。
* モル吸収率(ε)を決定: この値は通常、文献で提供されるか、標準ソリューションを使用して実験的に決定できます。
* 測定吸光度: 抽出されたキサントフィルサンプルの最大吸光度波長の吸光度を測定します。
* 濃度の計算: 濃度を解くためにビールランバートの法則の方程式を再配置します:c =a /(εl)。
考慮事項:
* 抽出効率: 抽出プロセスが効率的であり、すべてのキサントフィルがソース材料から抽出されていることを確認してください。
* 溶媒純度: 高品質のエタノールを使用して、不純物からの干渉を避けます。
* キャリブレーション: 測定前に分光光度計を常に校正して、正確な結果を確保してください。
* 波長選択: キサントフィル(通常は440〜450 nm前後)の最大吸光度のために、正しい波長を選択します。
* 干渉化合物: サンプル内の他の顔料は、同様の波長で吸収される可能性があることに注意してください。必要に応じて、方法を使用して、これらの干渉化合物からキサントフィルを分離します。
計算の例:
450 nmで0.500の吸光度を持つエタノールにキサントフィル抽出物があると仮定しましょう。 450 nmのキサントフィルの臼歯吸収率(ε)は25,000m⁻¹cm⁻¹であり、キュベットの経路長(L)は1 cmです。
ビールランバート法の使用:
c =a /(εl)
c =0.500 /(25,000m⁻¹cm⁻¹x1cm)
c =2.0×10⁻⁵m(または20 µm)
重要な注意: これは単純化された例です。特定の方法と計算は、使用している特定の状況と機器に依存します。正確な結果を得るには、関連する文献とプロトコルを必ず参照してください。