PCRコンポーネントとその機能:
1。テンプレートDNA:
* 関数: 増幅するDNA配列。ポリメラーゼ酵素がコピーするための青写真として機能します。
2。プライマー:
* 関数: テンプレートDNA上の特定の領域に相補的な短い一本鎖DNA配列(通常18〜30ヌクレオチド)。それらはテンプレートDNAに結合し、DNAポリメラーゼの出発点を提供します。
3。 DNAポリメラーゼ:
* 関数: テンプレートDNAとプライマーを使用して新しいDNA鎖を合成する酵素。 プライマーの3 '端に5インチから3'の方向にヌクレオチドを加えます。
4。デオキシヌクレオシド三リン酸(DNTP):
* 関数: DNAのビルディングブロック。それらは、4つの塩基(アデニン、シトシン、グアニン、チミン)を表すDATP、DCTP、DGTP、およびDTTPの4つのタイプで構成されています。 DNAポリメラーゼはこれらを使用して新しいDNA鎖を組み立てます。
5。バッファソリューション:
* 関数: 最適なDNAポリメラーゼ活性のために適切なpHおよびイオン強度を維持する塩とイオンが含まれています。
6。塩化マグネシウム(MGCL2):
* 関数: 触媒活性に必要なDNAポリメラーゼの補因子。また、DNA構造の安定化にも役立ちます。
7。水:
* 関数: 反応の溶媒とコンポーネントが相互作用する媒体を提供します。
PCRプロセスの簡単な要約:
1。変性: 反応混合物を94〜98°Cに加熱し、二本鎖テンプレートDNAを単一鎖に分離します。
2。アニーリング: 温度は50〜65°Cに下げられ、プライマーが一本鎖テンプレートDNA上の相補的配列に結合することができます。
3。拡張子: 温度は、DNAポリメラーゼの最適温度である72°Cに上昇します。ポリメラーゼはプライマーを拡張し、DNTPを追加して新しいDNA鎖を作成します。
これらの3つのステップは複数のサイクルで繰り返され、ターゲットDNA配列が指数関数的に増幅されます。