トランスフェクション効率は、特定のサンプル中の全細胞に対してトランスフェクトされた細胞数を数えることで計算できます。細胞数は、2 つの方法で数えることができます。最も頻繁に使用される方法は、扱いやすいレポーターを使用することです。これらのレポーターは、緑色蛍光タンパク質 (GFP)、ルシフェラーゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ (SEAP) である場合があります。トランスフェクション効率を計算する最新の方法は、核酸を標識して、細胞内送達を追跡できるようにすることです。ウェスタンブロッティング、免疫染色、機能アッセイなどの他のアプローチも、トランスフェクション効率の計算に使用できます。トランスフェクション効率は複数の実験パラメーターに依存するため、トランスフェクション効率の決定は、トランスフェクションに対するさまざまな要因の影響を決定する鍵となります。
対象となる主な分野
1.トランスフェクション効率の計算に使用される方法
– レポーター システム
2.トランスフェクション効率の計算方法
– 細胞計数
重要な用語:フローサイトメトリー、GFP、核酸標識、レポーター システム、トランスフェクション効率
トランスフェクション効率の計算に使用される方法
トランスフェクション効率の計算には、さまざまな種類の方法が使用されます。
<強い>1.レポーター システム
– 緑色蛍光タンパク質 (GFP) – GFP はクラゲに自然に含まれています。目的の遺伝子をGFP遺伝子に同時トランスフェクションすることにより、トランスフェクトされた細胞の定性的および定量的分析の両方に使用されます。定性分析は、蛍光顕微鏡下で行うことができます。定量分析はフローサイトメトリーで行うことができます。 GFP に加えて、赤色蛍光タンパク質 (RFP)、および黄色蛍光タンパク質 (YFP) もレポーターとして使用できます。 E.大腸菌 蛍光タンパク質を発現するコロニーを 図 1 に示します .
図 1:蛍光タンパク質
- ルシフェラーゼ – ルシフェラーゼはホタルに自然に存在し、光を生成します。ルシフェラーゼ アッセイは感度が高く、トランスフェクトされた DNA の定量分析に使用できます。
- ベータ-ガラクトシダーゼ – β-ガラクトシダーゼは E に含まれています。大腸菌 . X-gal による定性分析や、比色法、蛍光法、化学発光法による定量分析に使用されます。
- 分泌型アルカリホスファターゼ (SEAP) – SEAP は熱安定性レポーターであり、発現すると哺乳動物細胞から分泌されます。
2. 核酸標識 – 蛍光標識されたプラスミドをトランスフェクションに使用できます。その後、蛍光顕微鏡で数えることができます。
<強い>3.ウェスタンブロッティング、免疫染色、およびその他の機能アッセイ
トランスフェクション効率の計算方法
レポーターを示す細胞の数とレポーターを示さない細胞の数は、顕微鏡またはフローサイトメトリーでカウントできます。レポーターを示す細胞のパーセンテージは、トランスフェクション効率を示します。
図 2:トランスフェクション効率
結論
トランスフェクション効率は、サンプル中の全細胞数に対して、トランスフェクトされた DNA を示す細胞数を決定することによって計算できます。細胞数は、顕微鏡下で、またはレポーター システムを使用したフローサイトメトリーによって計算できます。
参照:
1.「トランスフェクション効率を測定します。」 Mirus Bio LLC 、ここから入手できます。
画像提供:
1.「E.蛍光タンパク質を発現する大腸菌」エリン・ロッド著 – 自身の作品 (CC BY-SA 4.0)、コモンズ ウィキメディア経由
