プラスミド マップは、プラスミド内のエレメントの相対位置です。プラスミドの特徴を理解することで、プラスミドマップを読み取ることができます。それらは、プラスミドの名前とサイズ、プラスミドの要素、それらの相対位置、およびプロモーターの向きです。複製起点 (ORI)、抗生物質耐性遺伝子、マルチプル クローニング サイト (MCS)、目的のインサートまたは遺伝子、プロモーター領域、選択マーカー、およびプライマー結合部位は、プラスミドの要素です。プラスミド内のエレメントの相対位置は、プラスミドをマッピングすることによって決定できます。プラスミドのマッピングに含まれるプロセスは、制限マッピングと呼ばれます。
対象となる主な分野
1.プラスミド マップとは
– 定義、制限マッピング
2.プラスミドマップの読み方
– プラスミド MapP の特徴
重要な用語:要素、プラスミドの名前とサイズ、プロモーターの方向、プラスミド マップ、制限酵素、制限マッピング
プラスミド マップとは
プラスミド マップは、プラスミドをグラフィカルに表現したもので、プラスミドの主要なランドマークまたはエレメントの位置を示します。プラスミド内のエレメントの相対位置は、制限マッピングによって特定できます .制限地図は、特定のプラスミド内の制限認識部位の地図です。したがって、制限酵素によるプラスミドの消化に関与しています。 図 1 に制限マップを示します .
図 1:制限マップ
制限マッピングでは 2 つの方法を使用できます:
<強い>1.制限消化
– 1 つまたは 2 つの制限酵素によるプラスミドの制限消化
– プラスミドから得られたフラグメントのサイズに基づくプラスミドのマッピング
<強い>2.シーケンシング
– プラスミド全体の配列決定
– プラスミドのエレメントの同定
プラスミド マップの読み方
図 2:プラスミド マップ
プラスミド マップの読み取りは、主にプラスミドの特徴に焦点を当てています。彼らは;
<強い>1.プラスミドの名前とサイズ
- プラスミドの名前とサイズは、環状プラスミドの中央に示されています。
<強い>2.プラスミドの要素 –
- 複製起点 – 細菌の転写機構をリクルートすることによる複製の開始に関与する DNA 配列。
- 抗生物質耐性遺伝子 – 選択培地でのプラスミド含有細菌の選択を可能にします。
- マルチクローニングサイト – 外来DNA断片を挿入するためのいくつかの制限認識部位からなる短い配列
- 挿入 – 目的の遺伝子をプラスミドに挿入
- プロモーター領域 - 転写中の RNA ポリメラーゼの結合部位
- 選択可能なマーカー – 挿入された遺伝子の発現の成功を選択することができます
- プライマー結合部位 – 配列決定のためのプラスミドの PCR 増幅の開始部位として機能します
<強い>3.プラスミド内のエレメントの相対位置
- プラスミド要素の相対位置は、制限マッピングまたは配列決定によってマッピングされます。
<強い>4.プロモーターの方向性
- プラスミド内のプロモーターの方向は、プラスミドの他のすべての要素の方向、特に挿入遺伝子の方向を決定する上で重要です。転写はプロモーターの 3' 末端で開始されます。したがって、遺伝子は発現するために適切な方向にある必要があります。
結論
プラスミド マップは、プラスミドの名前とサイズ、プラスミド内の要素の種類とそれらの相対位置などのプラスミド マップの特徴を理解することによって読み取ることができます。プロモーターの向き。
参照:
1.「プラスミドとは？」 アドジーン 、ここから入手できます。
画像提供:
1. Nothingserious による「PDONR221 マップ」 - シーケンスの分析:pDONR221。アドジーン。 2016 年 1 月 24 日に取得 (CC0)、コモンズ ウィキメディア経由
2. 「PGEX-3X クローニング ベクター」マグヌス マンスケ著 – マグナス マンスケ作成 (CC BY-SA 3.0)、コモンズ ウィキメディア経由
