トリプシンは、ペプチドの C 末端のリジンとアルギニン残基を切断するセリン プロテアーゼです。 細胞培養において、接着細胞を培養容器表面から解放するために最も広く使用されている酵素です。 トリプシンは、培養で増殖したほとんどの細胞タイプに容易に耐性があります。その活性は、培地に血清を添加することで簡単に中和できます。トリプシンのこれら 2 つの機能により、細胞培養での使用が容易になります。一般に、トリプシンは EDTA と共に細胞培養に添加されます。細胞培養におけるトリプシンの役割については、この記事で説明しています。
対象となる主な分野
1.トリプシンとは
– 定義、機能、機能
2.細胞培養におけるトリプシンの働き
– 細胞培養におけるトリプシンの役割
重要な用語:接着タンパク質、細胞接着、消化酵素、トリプシン、トリプシン化
トリプシンとは
トリプシンは、多くの脊椎動物の消化器系でタンパク質を分解する消化酵素です。膵液に含まれています。トリプシンは、ペプチドのカルボキシ末端のリジンおよびアルギニン残基を切断します。ただし、これら 2 つのアミノ酸の後にプラリネが続く場合、それらは切断されません。トリプシンの活性は多くのバイオテクノロジー プロセスで使用され、トリプシンの作用はトリプシン化として知られています。 またはトリプシンタンパク質分解。トリプシンの結晶構造は 図 1 に示されています .
図 1:トリプシン
トリプシンの作用に最適な pH は 7.6 ～ 8.5 です。一般に、フェノールレッドは、トリプシンアッセイで上記の pH 範囲を監視するために使用されます。フェノールレッドは、この pH 範囲でピンクがかった色になります。トリプシンアッセイはドライアイスで行います。
細胞培養におけるトリプシンの働き
原形質膜上のタンパク質は、細胞の正常な生理活性を維持するために不可欠なさまざまな機能を担っています。カドヘリンファミリーなどの一部の原形質膜タンパク質は、細胞骨格タンパク質を細胞外マトリックスに連結するアンカーとして機能する接着タンパク質です。これは、細胞接着と細胞移動に役立ちます。 図 2 は、原形質膜内の接着タンパク質を示しています。 .
図 2:細胞接着タンパク質
細胞培養では、トリプシンを培地に添加して、接着タンパク質を消化することにより培養容器表面から接着細胞を解放することができます。トリプシンはまた、接着タンパク質の消化によって凝集体から細胞を解放します。 EDTA は、培地中の二価イオンをキレートするために、トリプシンと共に細胞培養物にも添加されます。カルシウムイオンとマグネシウムイオンは、トリプシンの作用を阻害する可能性があります。最終的に、トリプシンは細胞培養から個々の細胞を取得するのに役立ち、細胞の下流処理を促進します.
結論
トリプシンは、ペプチドを消化する光分解酵素です。トリプシンは接着タンパク質を消化し、細胞を培地に放出するため、個々の細胞を得るために細胞培養で広く使用されています.
参照:
1.「哺乳動物細胞の細胞継代培養中のトリプシン誘発プロテオーム変化」。 Journal of Biomedical Science 、BioMed Central、2010 年 5 月 11 日、こちらから入手可能。
画像提供:
1. 「1UTN」 ユーザー:DrKjaergaard – 自身の作品:PDB ファイル 1UTN より。コモンズ ウィキメディア経由で PyMol (パブリック ドメイン) で作成
2. 英語版ウィキペディアのザブミレンコによる「細胞接着」 – コモンズ ウィキメディア経由でコモンズヘルパー (パブリック ドメイン) を使用して、計画的カオスによって en.wikipedia からコモンズに転送
