内生胞子染色で熱が使用される理由

内生胞子の染色には示差染色プロセスが使用されます。マラカイト グリーンは、サンプル内の栄養細胞と内生胞子の両方を染色する主要な染色剤です。次に、熱の使用は、一次染色を内生胞子に浸透させるのに役立ちます。脱色後、対比染色剤サフラニンを使用して背景を染色します。

Bacillus として知られる 2 つの病原性属 およびクロストリジウム 有害な環境条件に抵抗するために、代謝的に不活性な内生胞子を生成します。内生胞子は多くの致命的な病気を引き起こすため、それらの同定は臨床サンプルにおいて非常に重要です.

対象となる主な分野

1.エンドスポアとは
– 定義、事実
2. Endospore 染色とは
– エンドスポア染色のテクニック
3.内生胞子染色で熱を使用する理由
– 熱の使用

重要な用語:内生胞子、熱、マラカイト グリーン、毛穴、栄養細胞

内生胞子とは

内生胞子は、Bacillus などの病原性細菌属によって生成される耐性構造です。 およびクロストリジウム 劣悪な環境下で生き抜くために。これらの好ましくない条件は、熱、乾燥、放射線、または化学物質です。栄養細胞から内生胞子が生成されるプロセスは、胞子形成と呼ばれます。プロセスが完了するまでに 8 ～ 10 時間かかる場合があります。内生胞子は、細菌細胞内に存在する場合もあれば、遊離胞子として存在する場合もあります。内生胞子形成は 図 1 に示されています。

図 1:内生胞子の形成

エンドスポアは代謝的に不活性または休止状態です。それらは、保護的な外側のカバーで覆われた少量の細胞質と DNA を含んでいます。細胞壁はジピコリン酸で構成されており、内生胞子に耐熱性を与えます。内生胞子は、環境条件が良好になると発芽して新しい生物を生成します。 121 °C で 15 分間の湿熱処理は、細菌の内生胞子を破壊する可能性があります。

Endospore Staining とは

エンドスポア染色は、標本のさまざまな構造をさまざまな色で染色する差別的な染色プロセスです。それは栄養細胞から内生胞子の識別を可能にします。標準的な内生胞子染色プロセスは、Schaeffer-Dulton 法です。この技法の主染色はマラカイト グリーンで、対比染色はサフラニンです。

シェファー・ダルトン法 – 手順

1. 顕微鏡スライドに塗抹した後、細菌サンプルをマラカイト グリーン溶液で飽和させます。
2.次に、色素が蒸発し始めるまでスライドを 3 ～ 5 分間穏やかに加熱します。
3.
4. スライドを冷まし、水で洗浄して脱色する。最後に、対比染色後、スライドをすすぐ。
5.スライドを風乾し、顕微鏡で観察します。

ここでは、内生胞子はマラカイト グリーンで緑色に染色され、栄養細胞はサフラニンでピンク色に染色されています。 Schaeffer-Dulton 法による染色された内生胞子を 図 2 に示します .

図 2:内生胞子 (緑) と栄養細胞 (ピンク)

内生胞子染色の代替技術は、ドナー法として知られています。この方法では内生胞子は赤く染色されます。

エンドスポア染色で熱が使用される理由

内生胞子を覆うケラチンは染色に抵抗します。したがって、一次染色は内生胞子に押し込まれなければなりません。熱の使用は、内生胞子への一次染色の浸透を促進することです。マラカイト グリーンのスライドは、3 ～ 5 分間加熱できます。加熱時間は、内生胞子の壁に浸透した染料の量に正比例します。加熱時間が長いほど内生胞子壁に孔ができ、より多くの染料が浸透しやすくなります。

結論

内生胞子は、ほとんどの病原菌の生殖細胞です。したがって、サンプル中の内生胞子の同定は診断において重要です。

参照:

1.「エンドスポア染色 – 定義、技術、および手順の理解」。 顕微鏡マスター 、ここから入手できます。

画像提供:

1. ファラー、ソフィア、アレックスによる「内生胞子形成」 – Commons Wikimedia 経由の自作 (CC BY-SA 4.0)
2. 「Bacillus subtilis Spore」 By Y tambe (元のアップローダー) – Commons Wikimedia 経由の自身の作品 (CC BY-SA 3.0)