1。細胞からDNAを抽出します：
- 細胞溶解バッファーまたはDNA抽出キットを使用して、細胞膜を開き、その内容を放出します。
- 遠心分離や降水などの方法を通じて、DNAを他の細胞成分から分離します。
2。 DNAを浄化します：
- 酵素治療（例：プロテイナーゼK、RNase A）または精製技術（例：フェノールクロロホルム抽出、カラムクロマトグラフィー）を使用して、タンパク質やRNAなどの不純物を除去します。
3。 DNAをフラグメントに消化します：
- DNAを制限酵素で処理して、より小さな定義されたフラグメントにカットします。
- 特定のDNA配列を認識して切断する制限酵素を選択します。
4。 DNAフラグメントをサイズにかかせます：
- ゲル電気泳動やサイズ排出クロマトグラフィーなどの技術を使用して、サイズに基づいてDNAフラグメントを分離します。
5。ベクターにDNAフラグメントを結びつけます：
- DNAフラグメントと、宿主生物におけるDNA複製と発現に不可欠な配列を含むクローンまたは発現ベクターと組み合わせます。
-DNAリガーゼを使用して、DNAフラグメントをベクターに結び付けます。
6。組換えベクターを変換または転写します：
- 変換（細菌）、トランスフェクション（真核細胞）、またはエレクトロポレーションなどの技術を通じて、組換えベクターを宿主細胞（細菌、酵母、動物細胞）に導入します。
7。目的のDNAフラグメントで細胞を選択してクローンします：
- 形質転換またはトランスフェクトされた細胞を培養し、関心のあるDNA断片を含む組換えベクターを正常に統合した細胞を選択します。
- これらの細胞をクローンして、目的のDNAインサートを運ぶクローン集団を取得します。
8。クローン集団を拡張して分離します：
- クローン集団を栽培して、DNAフラグメントを含む細胞の数を拡大します。
- これらのクローン集団からDNAを分離します。
9。 DNAフラグメントの存在と完全性を確認します：
- 制限酵素消化、ゲル電気泳動、またはシーケンスを使用して分離DNAを分析して、DNAフラグメントの存在と構造的完全性を確認します。
10。目的のDNA構築物を伝播して維持します：
- さらなる分析、研究、またはバイオテクノロジーの用途のために、目的のDNAフラグメントを含むクローン集団またはDNA構築物を伝播して維持します。
これらの手順に従うことにより、DNAフラグメントから染色体を正常に作成でき、特定のDNAシーケンスを研究、操作、または利用できるようにします。
