染色体を線形化して、個々のレプリコンをパルスフィールドゲルで解決する必要があります。レプリコンは、サイズに基づいてシェフによって区切られています。通常、それは良好な解像度を得るために、多くの場合20〜30時間、長期間実行されます。
ここに、ストレプトマイセスの線形染色体を折りたたむ方法の手順があります：
1.アガロースゲルを準備します。 0.5x Tbeバッファーで1％アガロースゲルを作ります。
2。DNAサンプルをロードします。 DNAサンプルを6xロードバッファーと混合し、アガロースゲルにロードします。
3.ゲルを実行します。ゲルを14°Cで2 V/cmで20〜30時間実行します。
4。DNAを視覚化します。臭化エチジウムでゲルを染色し、UV光の下でDNAを視覚化します。
5。染色体を折ります。 Streptomycesの線形染色体は、ゲルに単一の大きなバンドとして表示されます。染色体を折り畳むには、ゲルからバンドを切り取り、パラフィルムに置きます。
6.パラフィルムを染色体の上に数回折り畳んで、コンパクトなサイズに折ります。
7.染色体を保存します。折り畳まれた染色体は、-20°Cまたは-80°Cで保存できます。
注： 臭化エチジウムを使用するときは、必ず手袋と目の保護を着用してください。臭化エチジウムは変異原と発がん物です。
