1。抗生物質耐性マーカー:
* 原則: この方法は、抗生物質耐性遺伝子とベクターへの目的の遺伝子とともに挿入することに依存しています。 組換えベクターをうまく吸収する細胞は、特定の抗生物質に対する耐性も獲得します。
* 手順: 細胞は抗生物質を含む培地で成長します。組換えベクターを取り上げて耐性遺伝子を発現させた細胞のみが生存し、コロニーを形成します。
* 例: 一般的に使用されるアンピシリン抵抗性遺伝子(AMPR)により、細菌はアンピシリンの存在下で生存することができます。
2。レポーター遺伝子:
* 原則: レポーター遺伝子は、検出可能なシグナルを生成するタンパク質をコードし、組換えDNAを含む細胞を簡単に識別できるようにします。
* 手順: レポーター遺伝子はしばしば望ましい遺伝子に関連しているため、レポーター遺伝子の発現は組換えDNAの挿入が成功したことを示します。
* 例:
* lacz遺伝子: 基板(x-gal)を分解して青色を生成するベータガラクトシダーゼをコードします。
* GFP遺伝子: 緑色の蛍光タンパク質をコードします。これにより、細胞は紫外線下で緑色に輝きます。
3。色の選択:
* 原則: この方法は、組換えDNAの存在が細胞の色を変化させる遺伝子系を利用します。
* 手順: 組換えDNAを含む細胞は、それなしで細胞と比較して異なる色を示します。
* 例: 青白スクリーニング法は、組換えDNAの挿入部位によって破壊されたLACZ遺伝子を備えたベクトルを使用します。組換えDNAを持つ細胞は白いコロニーを生成し、それを持たない細胞は青いコロニーを生成します。
4。 補完:
* 原則: この方法は、細胞が特定の生成物を生存または生成するために目的の遺伝子が必要な場合に使用されます。
* 手順: 機能性遺伝子を欠く細胞は、遺伝子を含む組換えベクターで形質転換されます。官能的な遺伝子を持つ細胞のみが生き残るか、望ましい生成物を生成します。
* 例: 特定の酵素を欠く細菌の株は、酵素をコードする遺伝子を含むベクターで形質転換できます。形質転換された細菌のみが生き残り、成長することができます。
5。蛍光活性化細胞ソート(FACS):
* 原則: FACSは、蛍光標識を利用して、特定の特性に基づいてセルを識別および並べ替えます。
* 手順: 目的の遺伝子を発現する細胞(蛍光マーカーにリンク)は、その蛍光特性に基づいて残りからソートされます。
* 利点: ハイスループットスクリーニング、正確な分離、および細胞の効率的な並べ替え。
6。 PCRスクリーニング:
* 原則: PCRは、組換えDNAの存在を確認するために、特定のDNA配列を増幅するために使用できます。
* 手順: DNAは細胞から抽出され、挿入された遺伝子に特異的なプライマーを使用して増幅されます。増幅された製品の存在は、挿入が成功することを示しています。
選択方法の選択は、特定の実験、使用されたベクトル、および望ましい結果に依存します。