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2つの異なる制限酵素で各サンプルを消化するのに役立つのはなぜですか?

2つの異なる制限酵素でサンプルを消化することは、分子生物学、特にクローニングとDNAフィンガープリンティングにおいて一般的な慣行です。いくつかの理由で役立ちます:

1。 DNAフラグメントサイズと同一性の確認:

* 二重消化: 異なる認識部位で切断する2つの酵素を使用すると、興味のあるDNAフラグメントのサイズを確認するのに役立ちます。各酵素で個別に消化するときに2つの異なるフラグメントサイズを取得すると、両方の酵素を一緒に消化するときに単一のフラグメントを使用すると、正しい断片を分離したことを強く示唆します。

* クローン内の挿入サイズの検証: 遺伝子またはDNAフラグメントをベクターに挿入すると、二重消化により、挿入物のサイズが予想され、正しい制限部位が存在することが保証されます。

2。一意のDNA配列の識別:

* 制限フラグメント長多型(RFLP)分析: この手法は、制限酵素を使用して、個人または特定の株に固有のさまざまなDNAフラグメントパターンを作成します。 2つの酵素を使用すると、より差別的な力が得られ、密接に関連するシーケンスを区別できます。

3。クローニング用の特定のDNAフラグメントを生成:

* 方向クローニング: 一部の制限酵素は、補完的なオーバーハングで「粘着性の終わり」を作成する方法でDNAを切断します。互換性のある粘着性の端を作成する2つの酵素を使用することにより、挿入物が正しい方向でベクトルに挿入されるようにします。

4。 DNAの一意の「指紋」を作成する:

* DNAフィンガープリント: 複数の制限酵素を使用することにより、識別または親子底検査に使用できるDNAフラグメントのユニークなパターンを生成できます。

5。突然変異の識別:

* 制限フラグメント長多型(RFLP)分析: 制限酵素認識部位内で発生する変異は、生成された断片のパターンを変えることができます。これは、遺伝的変異または変動を検出するために使用できます。

要約: 2つの異なる制限酵素を使用すると、フラグメントサイズの決定の精度の向上、同様のDNA配列間の識別の強化、クローニング用の特定のDNAフラグメントの生成など、いくつかの利点があります。

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