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実験でDNAとタンパク質のラベルを付けるために使用されますか?

実験では、DNAとタンパク質のラベルを付けるために使用されるさまざまな手法があり、それぞれに独自の利点と用途があります。一般的なラベル付け方法の内訳は次のとおりです。

DNA標識:

* 放射性標識:

* タイプ:

* ニック翻訳: DNAポリメラーゼを使用して、放射性ヌクレオチドをDNA断片に組み込みます。

* ランダムプライマーラベル: ランダムヘキサマープライマーとDNAポリメラーゼを使用して、放射性ヌクレオチドを組み込みます。

* 利点: 非常に敏感で、ハイブリダイゼーションアッセイと南ブロットで広く使用されています。

* 短所: 放射性材料の取り扱い、潜在的な安全性の懸念が必要です。

* 蛍光標識:

* タイプ:

* 蛍光色素:

*臭化エチジウム(ETBR)はDNAに結合し、UV光の下で蛍光を発します。

* Sybr Green Iは、ETBRよりも毒性が少ないより敏感な色素です。

* 蛍光標識ヌクレオチド: これらは、PCRまたはその他のDNA合成方法中に組み込むことができます。

* 利点: 高感度、非放射性、多重蛍光色素により多重化が可能になります。

* 短所: 放射性標識よりも感度が低くなる可能性があり、染料の選択は感度と応用に影響を与える可能性があります。

* ビオチン標識:

* タイプ:

* ビオチン化ヌクレオチド: PCRまたはその他のDNA合成法に組み込むことができます。

* 利点: 非ラジオアクティブでは、ストレプトアビジン結合酵素または蛍光プローブを使用した高感度での検出を可能にします。

* 短所: 一部の蛍光色素よりも感度が低い場合があり、ビオチンを検出するための追加のステップが必要になる場合があります。

タンパク質標識:

* 放射性標識:

* タイプ:

* 代謝標識: 細胞は放射性アミノ酸を含む培地で成長し、タンパク質が標識を組み込むことができます。

* in vitro標識: タンパク質は、放射性同位体で直接標識できます。

* 利点: タンパク質発現研究や結合アッセイなどの多くの用途で使用される高感度。

* 短所: 放射性材料の取り扱い、潜在的な安全性の懸念が必要です。

* 蛍光標識:

* タイプ:

* 蛍光色素:

* 直接ラベル: 染料は特定のアミノ酸残基またはタグに直接結合します。

* 間接標識: 蛍光色素で標識された抗体または他の結合分子は、タンパク質を標的とするために使用されます。

* 利点: 高感度、非放射性、多重蛍光色素により多重化が可能になります。

* 短所: 染料の選択は、感度とアプリケーションに影響を与える可能性があります。

* ビオチン標識:

* タイプ:

* タンパク質のビオチン化: タンパク質は、酵素または化学反応を使用して直接ビオチン化できます。

* 利点: 非ラジオアクティブでは、ストレプトアビジン結合酵素または蛍光プローブを使用した高感度での検出を可能にします。

* 短所: 一部の蛍光色素よりも感度が低い場合があり、ビオチンを検出するための追加のステップが必要になる場合があります。

その他の手法:

* アフィニティラベル: 特定のリガンドまたは抗体を使用して、タンパク質またはDNAを標識することを伴います。

* Chemistry:をクリックします ユニークな機能グループとの標識のために生体感染反応を利用します。

適切なラベル付け方法の選択:

最良のラベル付け方法は、特定の実験とその目標に依存します。考慮すべき要因は次のとおりです。

* 感度: 検出に必要な信号の量。

* アプリケーション: この手法は、意図したダウンストリームアプリケーションと互換性がある必要があります。

* コスト: 試薬と機器の費用。

* 安全性: 放射性標識には、特別な予防策が必要です。

* 機器の可用性: 一部の技術では、特殊な機器が必要です。

特定のラベル付け手法に関する詳細情報をご希望の場合は、アプリケーションについて詳しく説明したい場合はお知らせください。

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