真核細胞:
* 細胞壁: 真核細胞には、セルラーゼやペクチナーゼなどの酵素を使用して分解する必要がある細胞壁(植物と真菌)があります。
* 核膜: DNAは、破壊する必要がある膜を備えた核内に囲まれています。これには、多くの場合、洗剤を使用して膜の脂質二重層を分解します。
* クロマチン構造: DNAは、タンパク質(ヒストン)でクロマチンにしっかりと包装されています。これには、タンパク質を消化してDNAを放出するために、プロテイナーゼKなどの酵素を使用する必要があります。
細菌細胞:
* 細胞壁: 細菌細胞壁は、強力で硬い構造であるペプチドグリカンで構成されています。これには、壁を壊すための別のアプローチが必要です。 リゾチームや洗剤と酵素の組み合わせなどの酵素が一般的に使用されています。
* 核なし: 細菌DNAは、膜結合核に囲まれていません。これにより、破壊する核膜がないため、プロセスが簡素化されます。
* 円形DNA: 細菌DNAは、単一の円形染色体です。これにより、分離して浄化しやすくなります。
ここに比較表があります:
|機能|真核細胞|細菌細胞|
|-----------------------|--------------------------------------|---------------------------------|
|細胞壁|セルロース(植物)、キチン(菌)|ペプチドグリカン|
|核膜|存在|不在|
| DNA構造|クロマチンでパッケージ化された線形|円形、クロマチンなし|
| DNA抽出方法|機械的破壊、酵素、洗剤|酵素、洗剤|
細菌DNA抽出の特定のステップ:
1。細胞溶解: 酵素(リゾチーム)と洗剤の組み合わせを使用して、細胞壁と細胞膜を分解します。
2。 DNA沈殿: マイナス帯電したDNA分子を中和するために、高濃度の塩(NaCl)を追加します。これにより、溶解性が低下し、溶液から沈殿することができます。
3。 DNA分離: 遠心分離により、細胞の残りの残りの部分からDNAを分離します。 DNAは、チューブの底にペレットを形成します。
4。 DNA洗浄および精製: Ethanolのような溶液でDNAペレットを洗浄して、残りの不純物を除去します。 DNAは、カラムベースのアプローチを使用してさらに精製できます。
重要なメモ:
*細菌DNA抽出で使用される特定の方法と試薬は、細菌種と抽出の目的によって異なる場合があります。
*プロセスを簡素化し、さまざまな細菌種に事前に最適化された試薬を提供する市販のキットがあります。