cDNAライブラリとは?
cDNAライブラリーは、特定の細胞または組織に存在するmRNA転写産物を表すクローン化されたDNA配列のコレクションです。これは、遺伝子発現を研究し、新しい遺伝子を特定するための強力なツールです。
ここに故障があります:
* cDNA(相補的DNA): 酵素逆転写酵素を使用してmRNAテンプレートから合成されたDNA。これはmRNA配列の「鏡像」です。
* ライブラリ: 特定の遺伝子または転写産物セットを表すクローン化されたDNAフラグメントのコレクション。
RNAから構築されたcDNAライブラリはどのようにありますか?
このプロセスにはいくつかのステップが含まれます。
1。 RNA分離: RNAは、目的の細胞または組織から抽出されます。このRNAには、通常、mRNA、rRNA、およびtRNAの混合物が含まれています。
2。 mRNA濃縮: mRNAは、mRNA分子のpoly-a尾に結合するオリゴ(dt)クロマトグラフィーなどの技術を使用して、総RNAから分離されます。
3。逆転写: 逆転写酵素酵素を使用して、分離されたmRNAからのcDNAを合成します。 この酵素はmRNA配列を読み取り、相補的なDNA鎖を作成します。
4。 2番目の鎖合成: DNAの2番目の鎖は、DNAポリメラーゼを使用して合成され、二本鎖cDNA分子を作成します。
5。クローニング: cDNA分子は、プラスミドやバクテリオファージなどのベクターに挿入され、宿主細胞内で独立して複製できます。
6。変換: cDNAを含むベクターは、宿主生物(細菌など)に導入され、そこで増殖します。各細菌には異なるcDNAインサートが含まれます。
7。スクリーニング: ライブラリは、関心のあるcDNAを含むクローンを識別するためにスクリーニングされています。これは、特定のプローブでのハイブリダイゼーションなどの手法やcDNAインサートのシーケンスによって行うことができます。
cDNAライブラリの利点:
* 発現遺伝子を表します: 積極的に転写されているmRNA分子のみがcDNAに変換され、特定の時間に発現される遺伝子に関する情報を提供します。
* 操作が簡単: cDNAは二本鎖DNAであり、標準的な分子生物学技術を使用して簡単に操作できます。
* さまざまなアプリケーションに使用: cDNAライブラリは、遺伝子発現研究、遺伝子発見、機能ゲノミクス、および遺伝子治療で使用されています。
cDNAライブラリの制限:
* 発現遺伝子に限定: ゲノム全体に関する情報は含まれておらず、転写されている遺伝子のみが含まれています。
* 特定の細胞または組織を表します: cDNAライブラリは、RNAのソースに固有です。
* は完全に代表的でない場合があります: すべてのmRNA分子がcDNAライブラリーに等しく表されているわけではなく、遺伝子発現研究の精度に影響を与える可能性があります。
要約すると、cDNAライブラリは、特定の時間に特定の細胞または組織内の活性遺伝子のスナップショットを提供します。遺伝子発現を理解するための強力なツールであり、生物学的研究にさまざまな用途があります。