1。形質転換細胞の選択
* 抗生物質耐性： 最も一般的な方法は、プラスミド内に抗生物質耐性遺伝子を含めることに依存しています。この遺伝子により、形質転換された細菌は、その特定の抗生物質を含む成長媒体で生き残ることができます。変換されていない細菌は成長しません。
* その他の選択可能なマーカー： 一部のプラスミドは、次のような代替選択の利点を提供する遺伝子を運びます。
* 色の変化： 色のついた製品（青/白いスクリーニングなど）を生産したり、コロニーの色を変えたりします。
* 特定のメディアでの成長： 細菌が通常必要とする特定の栄養素を欠くメディアでの成長を可能にします。
2。プラスミド統合の検証
* pcr： ポリメラーゼ連鎖反応を使用して、プラスミドからの特定の遺伝子配列を増幅することができます。これにより、形質転換された細菌内のプラスミドDNAの存在が確認されます。
* 制限酵素消化： 特定の酵素は、独自の配列でDNAを切断します。 消化後のDNA断片のサイズを分析すると、プラスミドの存在とその完全性を確認できます。
* DNAシーケンス： この手法は、形質転換された細菌内のDNAの正確な配列を直接決定します。挿入された遺伝子の存在を確認し、不要な変異を除外します。
3。機能分析（遺伝子に応じて）
* タンパク質の発現： プラスミドがタンパク質をコードする遺伝子を持っている場合、ウエスタンブロッティングや酵素アッセイなどの技術を使用して、そのタンパク質の存在をテストできます。
* 表現型の変化： プラスミドに挿入された遺伝子が細菌の表現型に影響を与える場合（例えば、特定の酵素を生成したり、その代謝を変化させる能力）、形質転換された細菌のこれらの変化を観察できます。
例：一般的な変換実験
1。プラスミド： アンピシリン抵抗性（AMPR）の遺伝子を含むプラスミドと蛍光タンパク質（GFP）の遺伝子を使用します。
2。変換： プラスミドを細菌に導入します。
3。選択： アンピシリンを含む寒天プレートで細菌を栽培します。アンピシリン抵抗性遺伝子を持つ細菌のみが成長します。
4。検証： PCRを使用してGFP遺伝子の存在を確認し、蛍光のために顕微鏡下でコロニーを観察できます。
重要な考慮事項：
* コントロールグループ： ネガティブコントロール（変換されていない細菌）と陽性対照（特定のプラスミドで形質転換されることが知られている細菌）を常に含めて、結果を検証します。
* 効率： 形質転換効率は、プラスミドをうまく吸収する細菌の割合です。これは、細菌のひずみ、プラスミド、および形質転換方法によって異なります。
* 複数の手法： 多くの場合、選択、検証、および機能分析手法の組み合わせは、成功した変換の最も堅牢な確認を提供します。
特定の変換プロトコルまたは実験についてさらに質問がある場合はお知らせください！
