* チェーン終了: DDNTPには、DNAポリメラーゼが成長鎖で次のヌクレオチドを加えるために必要な3'-ヒドロキシル基がありません。これは、DDNTPがDNA鎖に組み込まれている場合、チェーンをさらに拡張できないことを意味します。
* 蛍光標識: DDNTPの各タイプ(DDATP、DDCTP、DDGTP、DDTTP)は、異なる蛍光色素で標識されています。これにより、シーケンス内の各ヌクレオチドの識別が可能になります。
* 断片のはしごを作成する: シーケンス中に、正常なヌクレオチド(DNTP)とDDNTPの混合が使用されます。ポリメラーゼは、正常ヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドのいずれかをランダムに組み込みます。これにより、さまざまな長さのDNAフラグメントが混合され、それぞれがDDNTPの取り込みにより特定のヌクレオチドで終了します。
* シーケンスを読む: これらの断片をサイズ(通常は電気泳動を介して)で分離し、蛍光ラベルを検出することにより、元のDNAフラグメントのヌクレオチドの正確な配列を決定できます。
したがって、検査室は次の理由でジデオキシヌクレオチドを使用している可能性があります:
* ゲノム分析: ゲノム全体または特定の遺伝子を配列決定して、変異、バリエーション、およびその他の遺伝情報を特定します。
* 法医学: 個人を特定したり、容疑者を犯罪現場に結びつけるためのDNAプロファイリング。
* 医療診断: 遺伝的障害の特定、病原体の検出、または疾患の進行の監視。
* 研究: 遺伝子発現、タンパク質機能、および進化的関係の研究。
要するに、さまざまな科学的および医療用途で使用される強力なツールであるサンガーシーケンス法にとって、ジデオキシヌクレオチドは重要です。