1。タンパク質は反応に干渉します:
*カリメトリックアッセイであるディシュ反応は、DNAのデオキシリボース糖のジフェニルアミンとの反応に依存して、青色の生成物を生成します。
*タンパク質には、反応を妨げる可能性のある反応基を持つアミノ酸も含まれており、偽陽性の結果につながる 不正確なDNA定量化。
2。タンパク質は反応生成物と同じ波長で吸収します:
*タンパク質とディシュ反応のブルー色の生成物の両方が、同様の波長(約595 nm)で光を吸収します。
*これは、タンパク質の存在が吸光度を増加させることを意味します 測定された波長では、不正確なDNA定量にさらに寄与します。
したがって、正確で信頼性の高いDNAの定量化を確保するには、ディシュ反応の前にタンパク質を除去することが重要です。 これは通常、タンパク質沈殿によって達成されます トリクロロ酢酸(TCA)または過塩素酸(PCA)の使用などの方法。
要約: タンパク質は、試薬と反応し、反応生成物と同じ波長で吸収することにより、ディシュ反応を妨げます。それらの除去は、正確なDNA定量化の結果を得るために不可欠です。