凍結生物学は、氷点下の温度での生命の研究です。しかし、それに対する私たちの関心は、氷河環境で生き残るための新しいライフスタイルを創造すること以外にあります.タンパク質、細胞、組織の小片、または臓器全体を非常に低温で保存できるため、現在利用可能なソースを将来利用することができます.
この技術の適用例は、生殖細胞 (精子細胞および卵母細胞) または胚の凍結保存であり、生命の奇跡が起こるのに適した個体が利用可能になるまで続きます。現在、私たちの野心は、イエネコの卵巣組織の凍結保存に取り組みながら、絶滅危惧種の子犬を生き返らせる可能性です.
猫は、絶滅の危機に瀕しているネコ科の動物と系統発生的および生理学的な類似性を示します。さらに、獣医クリニックで避妊手術が行われた後、生殖組織は広く利用可能です。このタイプの組織を凍結保存するための調整された方法を開発することを目的として、飼い猫の卵巣を使用しました。この技術を開発することで、死亡した、または避妊手術が必要な野生のネコ科動物の卵巣での使用に適応できるようになります。解凍後、生殖細胞は卵巣組織移植という有望な技術により、in vitro または in vivo で再活性化できます。
凍結生物学で直面する障害の 1 つは、図 1 に詳述されている組織内の氷の形成です。これを回避するために、通常、細胞からの水の外部化を促進する凍結保護化合物を含む溶液が適用されます。 DMSO、エチレングリコール、または両方の組み合わせを含む3つの異なる溶液をテストして、組織が解凍された後の細胞構造のより良い維持を可能にするものを確認しました.適応パターンの温度低下が実行され、サンプルは液体窒素中 -196°C で保存されました。
解凍後、光学顕微鏡と透過型電子顕微鏡で組織を分析しました。これにより、非常に高い倍率での分析が可能になり、細胞内化合物の評価が可能になります。
1.5 M の濃度で DMSO を含む溶液が、卵母細胞の形態を維持するという点で最良であることがわかりました。他の溶液は、隣接する細胞間の剥離、細胞質内の小胞の形成、原形質膜と核膜の破壊などの損傷を引き起こしました。このような損傷により、細胞は解凍後に活性を回復できなくなり、おそらく死に至ります。
次に、さらに、細胞構造を維持するために、凍結保存プロトコルが卵母細胞の実現可能性を維持できたかどうかを調べることを目指しています。凍結卵巣組織に存在する生殖細胞の発生を誘導するには、 in vitro 培養または移植技術が適用される場合があります。次のステップは、これらのテストを実行して、凍結保存された卵母細胞が受精するために成長および発達する能力を持っていると結論付けることです.
これらの発見により、野生のネコ科動物の卵巣組織の凍結保存に向けて正しい道を進んでいると結論付けることができます。一方で、やるべきことはまだたくさんあります。私たちは現在、凍結保存と移植技術の両方を改善する方法を研究しており、将来的には、あるネコ科の種の凍結解凍卵母細胞を別の種に開発できるようにすることができます.
これらの調査結果は、ジャーナル Cryobiology に最近掲載された、エチレン グリコールおよびジメチル スルホキシドによる凍結保存後の猫卵巣卵胞の超構造というタイトルの記事に記載されています。 この作品は ブラジル、ブラジリア大学のエレン C. R. レオネル、ジャニス M. V. ビレラ、ダニエラ J. カリーリョ、カロライナ M. ルッチが実施。
