主な違い ELISA と Dot ELISA の違いは、ELISA が生物学的サンプル中の抗体、ホルモン、ペプチド、またはその他のタンパク質の検出と定量化に役立つのに対し、Dot-ELISA では、発色基質は酵素活性の領域にのみ沈殿することです。 さらに、ELISA の 3 つの主要なタイプは、直接 ELISA、間接 ELISA、免疫測定法またはサンドイッチ ELISA であり、ドット ELISA は一般的な ELISA と同じ固相酵素免疫測定法の一種です。
ELISA と dot-ELISA は、タンパク質、特に抗原の量を検出および定量化するために使用される 2 種類の免疫学的ツールです。それらは、より高速で、柔軟性があり、再現性があり、高感度で、ハイスループットのアッセイです。
対象となる主な分野
1. ELISAとは
– 定義、タイプ、重要性
2.ドットELISAとは
– 定義、方法、重要性
3. ELISA とドット ELISA の類似点は何ですか
– 共通機能の概要
4. ELISA とドット ELISA の違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
直接 ELISA、ドット ELISA、ELISA、免疫学的アッセイ、間接 ELISA、サンドイッチ ELISA
ELISAとは
ELISA (酵素免疫測定法 ）は、一次抗体の助けを借りて生物学的サンプル中の特定のタンパク質の検出を担う固相酵素イムノアッセイの一種です。このテストでは、酵素反応が結合した一次抗体の検出に役立ちます。ここで、酵素は発色基質を使用して発色します。また、ELISAで使用する固相は主にマイクロタイタープレートです。
図 1:マイクロタイター プレート
さらに、方法論に基づく ELISA には主に 3 つのタイプがあります。
ダイレクト ELISA
直接 ELISA では、プレートの表面をサンプルでコーティングすると、酵素結合抗体がプレート上の特定のタンパク質と結合できるようになります。次に、発色基質を添加すると、タンパク質結合抗体の検出に役立ちます。
図 2:直接 ELISA
間接ELISA
間接 ELISA では、サンプル中の特定のタンパク質を 2 段階の結合プロセスで検出します。ここで、最初のステップは、プレートをサンプルでコーティングし、特定のタイプの一次抗体とともにインキュベートすることです。次に、このプレートを一次抗体に結合する二次抗体とインキュベートします。さらに、この二次抗体には酵素が結合しています。したがって、発色基質を添加すると、発色を利用してプレート上の特定のタンパク質を検出するのに役立ちます。
免疫/サンドイッチ ELISA
サンドイッチ ELISA では、最初のステップは、サンプルから検出する特定のタンパク質を一次抗体と二次抗体の間に挟むことです。ここでは、最初のプロセスはプレートを一次抗体でコーティングすることですが、サンプルではコーティングしません。次に、このプレートでサンプルをインキュベートします。その後、一次抗体に結合した特定のタンパク質を、二次抗体を使用して検出できます。
ドット ELISA とは
ドット ELISA は固相酵素イムノアッセイの一種です。ドット ELISA の最大の特徴は、酵素活性のある領域にのみ発色基質が沈殿することです。ここで、固相はニトロセルロース膜であり、タンパク質の表面への結合を可能にします。サンプルをニトロセルロース メンブレンでインキュベートした後、余分なサンプルを洗い流し、ニトロセルロース メンブレンの結合していない表面をブロックします。
図 3:ドット ELISA
次に、一次抗体をニトロセルロース膜に添加します。最後に、酵素に結合した二次抗体を添加すると、タンパク質結合二次抗体の検出が容易になります。したがって、これにより、タンパク質-抗体複合体がニトロセルロース膜上に透明なドットとして表示されます。
ELISA と Dot ELISA の類似点は何ですか
- ELISA とドット ELISA は、生物学的サンプル中のタンパク質を検出および定量するために使用される 2 種類の免疫学的アッセイです。
- 固相酵素免疫測定法 (EIA) です。
- また、どちらの方法も、二次抗体に結合したアルカリホスファターゼ (AP) や西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) などの酵素を使用します。酵素作用によって発色する適切な発色基質を加えることで、サンプル中の特定のタンパク質を検出できます。
- さらに、どちらの方法も高感度でハイスループットです。また、高速で再現性もあります。
ELISA と Dot ELISA の違いは何ですか
定義
ELISA (酵素結合免疫吸着アッセイ) は、体液のさまざまな検査を測定するために使用される酵素を含む迅速な免疫化学検査を指し、ドット ELISA は固体を指します。抗原または抗体のいずれかを検出するために使用できるフェーズイムノアッセイ。したがって、これが ELISA とドット ELISA の主な違いです。
タイプ
ELISA には、直接 ELISA、間接 ELISA、サンドイッチ ELISA の 3 種類があり、ドット ELISA はサンドイッチ ELISA の一種です。
方法
ELISA では、抗体を利用して特定のタンパク質を検出し、結合した抗体を酵素反応によって検出しますが、ドット ELISA では、発色基質は酵素活性のある領域にのみ結合します。したがって、これが ELISA とドット ELISA のもう 1 つの違いです。
固相
ELISA とドット ELISA のもう 1 つの違いは、ELISA では主に固相としてマイクロタイター プレートを使用するのに対し、ドット ELISA では固相としてニトロセルロース膜を使用することです。
結論
ELISA は、抗体を利用して生物学的サンプル中の特定のタンパク質を検出する免疫学的アッセイの一種です。ここで、タンパク質に結合した抗体の検出には、酵素反応による発色が関与している。また、ドットELISAはサンドイッチELISAの一種です。ここで、発色基質は、酵素活性のある領域に沈殿します。したがって、ELISA とドット ELISA の主な違いは検出方法です。
参照:
1. 「TechNote:ELISA アッセイ タイプの違いは何ですか?」 Enzo Life Sciences、2018 年 7 月 27 日、こちらから入手可能
2. Z、スボボドワ。 「ドット ELISA アフィニティ テスト:モノクローナル抗体の結合活性を推定するための簡単で低コストの方法。」 Journal of Analytical &Bioanalytical Techniques、vol。 04、いいえ。 03, 2013, doi:10.4172/2155-9872.1000168.
画像提供:
1. 「マイクロタイター プレート」Jeffrey M. Vinocur 著 – Commons Wikimedia 経由の自作 (CC BY 2.5)
2. 「ELISA ダイアグラム」by Cavitri – Commons Wikimedia による自作 (CC BY 3.0)
3. 「Dot-Elisa」 MrPotatoDeluxe 著 – Commons Wikimedia による自身の作品（CC BY-SA 3.0）
