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科学者は、DNAを分離するためにゲルを準備する際に、なぜより高い割合と低いパーセントのアガロース溶液を使用するのでしょうか?

ゲル内のアガロースの割合は、孔のサイズを決定します 。この細孔サイズは、DNAフラグメントが電気泳動によってどのように分離されるかに直接影響します。科学者がより高い割合または低い割合を選択する理由は次のとおりです。

より高い割合アガロース(例:1-2%):

* 細孔サイズが小さい: これにより、より小さなDNAフラグメントをより適切に分離できます 。 ジェルはふるいのように機能し、小さなフラグメントを長く閉じ込めて、よりゆっくりと移動します。

* 使用:

* 1000塩基対未満のDNAフラグメントの分析(BP)

*小さなフラグメントの高解像度分離

*制限フラグメント長多型(RFLP)分析

アガロースの割合が低い(例:0.5-0.8%):

* より大きな細孔サイズ: これにより、より大きなDNAフラグメントの移行が速くなります

* 使用:

*大きなDNAフラグメントを分離する(1000 bpを超える)

*ゲノムDNAの分析

*非常に大きなDNA分子のためのパルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)

重要な考慮事項:

* フラグメントサイズ: あなたが分離しようとしているDNAフラグメントのサイズは、ゲルの割合を決定する主な要因です。

* 解像度: より高いパーセンテージゲルは、小さなフラグメントを分離するためにより高い分解能を提供しますが、大きな断片を分離するには低い割合のゲルが適しています。

* 移行時間: より高い割合ゲルが移動を遅くするため、より長い実行時間が必要です。より低いゲルのゲルは、より速い移動を可能にします。

例:

500〜1000 bpの範囲のフラグメントを含む制限酵素ダイジェストの産物を分析している場合、1%アガロースゲルを選択する可能性があります。 50,000〜100,000 bpの範囲のフラグメントを持つゲノムDNAを分析している場合、0.7%のアガロースゲルがより適切になります。

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