これがどのように機能しますか:
1。選択可能なマーカー遺伝子: 組換えプラスミドは、多くの場合、特定の抗生物質に対する耐性を付与する遺伝子を運びます。 たとえば、アンピシリン抵抗性の遺伝子(AMPR)。
2。変換: 細菌は組換えプラスミドとともに形質転換されます。
3。選択: 形質転換された細菌は、選択可能なマーカー遺伝子が耐性を提供する抗生物質を含む培地で成長します(例:アンピシリン)。
4。成長: AMPR遺伝子と組換えプラスミドを取り上げた細菌のみが、抗生物質を含む培地で生存し、成長します。これは、抗生物質を不活性化できるためです。
5。確認: 細菌が実際に組換えプラスミドを取り上げていることを確認するために、PCRやコロニーのハイブリダイゼーションなどの追加の確認方法を使用して、プラスミド内の特定のDNA配列の存在を検証できます。
例:
*緑色蛍光タンパク質(GFP)の遺伝子を運ぶ組換えプラスミドとAMPR遺伝子は、細菌を形質転換するために使用されます。
*細菌は、アンピシリンを含む寒天に播種されています。
*組換えプラスミド(GFP遺伝子とAMPR遺伝子の両方を含む)を含む細菌のみが成長します。
*これらのコロニーは、蛍光顕微鏡を使用してGFP発現についてさらにスクリーニングできます。
この方法により、組換えプラスミドを受けた細菌の選択が可能になり、成功した変換を特定するための簡単な方法を提供します。