主な違い MTT アッセイと MTS アッセイの違いは、MTT アッセイにはホルマザン結晶の可溶化に関連する追加のステップがあるのに対し、MTS アッセイはホルマザン結晶の可溶化に関連していないことです。 .
MTT および MTS アッセイは、in vitro で細胞生存率を測定するために使用される 2 種類のアッセイです。 .それらは、細胞増殖および細胞毒性に対する試験分子の効果を明らかにするのに役立ち、細胞の生存率に影響を与えます。さらに、MTT アッセイは MTS アッセイよりも時間がかかります。
対象となる主な分野
1. MTTアッセイとは
– 定義、プロセス、重要性
2. MTS アッセイとは
– 定義、プロセス、重要性
3. MTT と MTS アッセイの類似点は何ですか
– 共通機能の概要
4. MTT アッセイと MTS アッセイの違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
細胞増殖、細胞生存率、細胞毒性、MTS アッセイ、MTT アッセイ
MTT アッセイとは
MTT アッセイは、ハイスループット スクリーニング (HTS) に適した 96 ウェル フォーマット用に開発された最初の均一細胞生存率アッセイです。このアッセイの原理は、生存細胞に存在するNAD(P)H依存性細胞酸化還元酵素という酵素の作用によって細胞がテトラゾリウム色素を還元する能力に基づいて、細胞生存率を決定することです。ここで、MTT アッセイに使用されるテトラゾリウム色素は、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウム ブロマイドで、黄色です。上記の酵素作用により、細胞内および細胞表面付近および培養培地中に沈殿する結晶の形態の不溶性ホルマザン生成物が形成される。ただし、ホルマザン生成物の量は吸光度を測定することによって測定されるため、不溶性結晶を最初に可溶化する必要があり、その後 570 nm で吸光度を測定できます。
図 1:MTT 反応
ただし、MTT アッセイでは使用する材料と手順が少なくなりますが、この方法にはいくつかの欠点があります。このアッセイは、細胞の懸濁には適していません。さらに、サンプル中に存在する沈殿したタンパク質や細胞破片は、吸光度測定を妨害し、感度とアッセイの精度を低下させる可能性があります。また、アッセイ時間とサンプルに存在する細胞数は、細胞の種類ごとに最適化する必要があります。
MTS アッセイとは
MTS アッセイは、新しいタイプのテトラゾリウム色素を使用するため、MTT アッセイの新しい方法であり、最終的に水性の可溶性ホルマザン生成物になります。ここで、MTS アッセイで使用されるテトラゾリウム色素は、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウムです。可溶性ホルマザン色素の形成は、中間電子受容体として機能するフェナジン メトサルフェート (PMS) の存在下で発生し、NADH から電子を移動してテトラゾリウム色素を還元し、可溶性ホルマザン生成物を形成します。
図 2:MTT プレート
可溶性ホルマザン生成物の直接形成により、MTT アッセイのホルマザン生成物の可溶化ステップが減少します。したがって、MTS アッセイはより効率的で、時間もかかりません。また、培地の除去およびホルマザン生成物の可溶化中に発生する可能性のある細胞損失などの潜在的なエラーを取り除きます。さらに、得られたホルマザン生成物は色が濃くなります。これにより、アッセイの感度と精度が向上します。
MTT と MTS アッセイの類似点
- MTT および MTS アッセイは、in vitro での細胞生存率を測定する 2 種類のアッセイです。
- どちらのアッセイも、細胞増殖と細胞毒性に対する試験分子の効果を評価するのに役立ちます。
- また、どちらも比色アッセイです。
- さらに、テトラゾリウム色素をホルマザンに還元する細胞の能力に基づいて、細胞の代謝活性を評価します。
- さらに、上記の還元の原因となる酵素は、生細胞に存在する NAD(P)H 依存性細胞酸化還元酵素です。
- さらに、原形質膜の電子伝達によって細胞外で還元反応が起こります。
- MTT 試薬は光に敏感です。したがって、これらのアッセイは暗所で行う必要があります。
- さらに、テトラゾリウム色素の添加後の両方のアッセイのインキュベーション時間は同じで、37°C で 1 ～ 4 時間です。
MTT と MTS アッセイの違い
定義
MTT アッセイは、比色アッセイを指します MTSアッセイは、MTTアッセイで必要な断続的なステップなしで試薬を細胞培養に直接添加するという利便性を提供する「ワンステップ」MTTアッセイを指しますが、細胞の代謝活性を評価するためのものです。したがって、これが MTT アッセイと MTS アッセイの主な違いです。
アッセイで使用されるテトラゾリウム色素の種類
さらに、MTT アッセイは MTT (3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウム ブロマイド) を使用しますが、MTS アッセイは MTS (3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5) を使用します。 -(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウム)
フォルマザン製品の溶解度
また、MTT アッセイのホルマザン生成物は不溶性ですが、MTS アッセイのホルマザン生成物は可溶性です。したがって、これは MTT アッセイと MTS アッセイの重要な違いです。
吸収の測定
さらに、吸光度は 490 nm で測定されるのに対し、MTT アッセイでは 570 nm で吸光度が測定されます。
時間
時間も MTT アッセイと MTS アッセイの違いです。 MTS アッセイは、MTT アッセイよりも時間がかかりません。
感度と精度
さらに、MTT アッセイは感度と精度が低く、細胞破片と沈殿したタンパク質が吸光度測定を妨害する可能性があるため、MTS アッセイはより感度が高く正確です。フォルマザン製品。
費用
MTT と MTS アッセイのもう 1 つの違いはコストです。 MTT アッセイは MTS アッセイよりも安価です。
結論
MTT アッセイは、細胞増殖および細胞毒性に対する試験分子の効果を評価するために細胞生存率を測定するための古典的なアッセイです。ただし、MTT アッセイで得られるホルマザン生成物は不溶性です。したがって、このアッセイには、ホルマザン生成物を可溶化するための追加の手順が必要です。対照的に、MTS アッセイは細胞生存率を測定するための新しい方法であり、MTT アッセイ手順の 1 つのステップを削減する可溶性ホルマザンを生成する新しい種類のテトラゾリウム塩を使用します。したがって、MTS アッセイは、MTT アッセイと比較してより効率的です。したがって、MTT アッセイと MTS アッセイの主な違いは、ホルマザン生成物の特性です。
参照:
1. Riss TL、Moravec RA、Niles ALなど細胞生存率アッセイ。 2013 年 5 月 1 日 [2016 年 7 月 1 日更新]。中:Sittampalam GS、Coussens NP、Brimacombe K など、編集者。アッセイガイダンスマニュアル[インターネット]。 Bethesda (MD):Eli Lilly &Company および National Center for Advancing Translational Sciences。 2004 年 - ここで入手可能。
画像提供:
1.「MTT 反応」Rogan Grant 著 – 自身の作品 (CC BY-SA 4.0)、Commons Wikimedia 経由
2. 「MTTプレート」Shinryuu – Commons Wikimedia経由の自作（パブリックドメイン）
