1。細胞溶解：
- 細胞（植物または動物組織）、塩、液体食器洗い石鹸、DNA抽出バッファー（TEバッファーまたはTris-EDTAバッファー）のサンプルを含む材料を集めます。
- ティッシュサンプルの小さな部分を迫撃砲と乳棒に入れ、蓋付きの小さな容器に入れます。
- サンプルに少量の塩を加えます（組織1グラムあたり約1/4小さじ1/4杯）。
- 混合物に石鹸を数滴加え、組織を徹底的に粉砕またはマッシュします。
- このステップは細胞膜を開き、DNAを放出します。
2。タンパク質の沈殿：
- 溶解物（破損した細胞の混合）を遠心管に移します。
- 溶解物の体積に等しいコールドDNA抽出バッファーの量を追加します。徹底的に混ぜます。
- DNA抽出バッファーには、細胞膜とタンパク質の溶解に役立つ洗剤、および溶液からタンパク質（DNAに関連するヒストンを含む）を沈殿させるのに役立つ塩溶液が含まれています。
- タンパク質は塊を形成し、DNAから分離します。
3。 DNA沈殿：
- 混合物を高速で数分間遠心分離します（約12,000〜15,000 rpm）。
- これにより、沈殿したタンパク質と細胞の破片がチューブの底にペレットを形成し、DNAを上清（ペレットの上の液体）に残します。
4。 DNA収集：
- DNAを含む上清を新しいチューブに慎重に取り除きます。
- 主にタンパク質と細胞の破片が含まれているため、ペレットのいずれかを転送しないでください。
- 現在、DNAは比較的純粋な形で、ほとんどの細胞成分やタンパク質が含まれていません。
エタノール抽出：
1。 DNA沈殿：
- 塩石鹸抽出からDNA溶液を含むチューブに、等量の冷たい95％-100％エタノールを加えます。
- チューブを数回逆転させて、静かに混ぜます。これによりDNAをせん断する可能性があるため、渦はしないでください。
- DNAは、白い糸状の質量として溶液から沈殿し始めます。
2。 DNA洗浄：
- 混合物を高速で数分間遠心分離します（約12,000〜15,000 rpm）。
- DNAはチューブの底にペレットを形成します。ペレットを乱すことなく、上清（エタノール溶液）を慎重に除去します。
3。 DNA乾燥：
- DNAペレットを冷たい70％エタノールでゆっくりとすすぎ、残留塩を除去します。
- チューブの底にDNAを収集するために、簡単に遠心分離します。
- ペレットを乱すことなく、エタノールを慎重に除去します。
- DNAペレットを数分間空気乾燥させます。
4。 DNA再懸濁：
- DNAペレットを含むチューブに少量のDNA抽出バッファー（TEバッファーまたはTris-EDTAバッファー）を追加します。
- マイクロピペットを使用して、完全に溶解するまで上下にピペットすることにより、DNAを優しく再懸濁します。
- DNAは、PCR、ゲル電気泳動、またはその他の分子生物学技術など、さらなる分析の準備ができました。
どちらの方法も、細胞膜を破壊し、DNAを放出し、沈殿と遠心分離を通じて他の細胞成分からDNAを分離することを目的としています。彼らは、基本的な実験と教育目的のためにDNAを抽出するためのシンプルで費用対効果の高い方法を提供します。
