1。基本固有の化学修正:
* g(グアニン): ジメチル硫酸(DMS)は、N7位置でグアニンをメチル化します。
* a(アデニン)&g(グアニン): ギ酸はアデニンとグアニンの両方を剥離します。
* C(シトシン): ヒドラジンは、シトシン残基で特異的に切断します。
* C(シトシン)&T(ティミン): 塩(たとえば、NaCl)の存在下のヒドラジンも、チミン残基で切断します。
2。切断反応:
* ピペリジン: これは、鎖切断の重要な試薬です。化学修飾の後に使用され、修正されたベースでDNAバックボーンを破壊します。
3。その他の試薬:
* バッファ: 溶液は、pHおよびイオン条件を維持するために適切なバッファーを使用して準備されています。
* エタノール: DNAフラグメントの沈殿に使用されます。
* アクリルアミドゲル電気泳動: 修飾されたDNAフラグメントは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用してサイズによって分離されます。
化学修正に関する重要なポイント:
* 特定の反応条件: 各化学反応は、最大の効率と最小限の副反応を確保するために、pH、温度、および時間の特定の条件下で実行されます。
* 制御された変更: 反応は慎重に制御され、DNAサンプルの塩基のごく一部のみを変更します。
* ラベル: DNAフラグメントの一方の端は、通常、電気泳動中の視覚化のために放射性同位体(例えば32p)で標識されます。
Maxam-Gilbertシーケンスの利点:
*高精度と解像度
*長いDNAフラグメントのシーケンスに役立ちます
短所:
*サンガーシーケンスよりも複雑で時間がかかります
*危険な化学物質の処理が必要です
*サンガーシーケンスなどのより効率的な方法の開発により、あまり一般的には使用されていません。
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