タンパク質検出の色反応の原理
色反応は、タンパク質の検出と定量化に広く使用されています。彼らは、タンパク質分子内の特定の化学グループが特定の試薬と反応して色のついた製品を生産できるという原則に依存しています。生成される色の強度は、存在するタンパク質の量に直接比例します。これが原則の内訳です：
1。 特定の機能グループ：
- タンパク質には、アミノ基（-NH2）、カルボキシル基（-COOH）、芳香環（例えば、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニン）を含むさまざまな官能基が含まれています。
- これらのグループは、特定の試薬とは異なる反応を示し、色付き製品を形成します。
2。 化学反応：
- biuret反応： この反応には、タンパク質に存在するペプチド結合と銅イオン（Cu2+）の反応が含まれます。結果として得られる複合体は、バイオレット色を生成します。
- ローリー反応： この方法は、ビュレット反応と、チロシンおよびトリプトファン残基によるフォリン・シオカルテウ試薬の減少を組み合わせています。結果として得られる青色は非常に敏感で、タンパク質の定量化に広く使用されています。
- ブラッドフォードアッセイ： この方法では、クーマシーブリリアントブルーG-250染料を利用します。これは、タンパク質に結合し、茶色から青まで色を変えます。塩基性アミノ酸、特にアルギニンに対する染料の親和性は、色の変化に寄与します。
- ニンヒドリン反応： この反応には、ニンヒドリンと遊離アミノ基のアミノ酸とペプチドの反応が含まれます。結果として得られる紫色は、アミノ酸とペプチドの検出と定量化に使用されますが、タンパク質にとっては敏感ではありません。
3。 分光光度測定：
- これらの反応で生成された色の生成物は、分光光度計を使用して測定されます。
- 特定の波長での溶液の吸光度は、タンパク質の濃度に直接比例します。
- 未知のサンプルの吸光度を既知のタンパク質濃度を使用して作成した標準曲線と比較することにより、未知のタンパク質濃度を決定できます。
4。 色の強度に影響する要因：
- タンパク質濃度： タンパク質濃度が高いほど、より強い色につながります。
- ph： 各反応には、最大の色発達のために最適なpH範囲があります。
- 温度： 温度は、反応速度と色の強度に影響を与える可能性があります。
- 干渉物質： 試薬と反応する他の分子の存在は、反応を妨害し、不正確な結果につながる可能性があります。
5。 制限：
- 感度： すべての反応が等しく敏感であるわけではありません。ローリーとブラッドフォードのアッセイは非常に敏感ですが、ビューレット反応は敏感ではありません。
- 特異性： 一部の反応は、特定のアミノ酸またはタンパク質タイプにより敏感です。
- 干渉： サンプルに存在する干渉物質は、色の発達に影響を与える可能性があります。
結論：
色反応は、タンパク質の検出と定量化のための貴重なツールです。関連する特定の機能グループ、発生する化学反応、および色の強度に影響する要因を含む、これらの反応の根本的な原則を理解することは、正確で信頼できる結果を得るために重要です。
