主な違い ニトロセルロースとナイロンメンブレンの違いは、ニトロセルロースメンブレンがタンパク質結合に対して高い親和性を持っているのに対し、ナイロンメンブレンは核酸結合に対して高い親和性を持っているということです。 さらに、疎水性および静電相互作用が高分子をニトロセルロース膜に結合し、イオン性、疎水性、および静電相互作用が高分子をナイロン膜に結合します
ニトロセルロースとナイロン膜は、高分子がゲルから転写される 2 種類の膜です。ただし、ニトロセルロース膜は、DNA や RNA の結合にも使用できます。
対象となる主な分野
1.ニトロセルロース膜とは
– 定義、構造、バインディングのメカニズム、利点
2.ナイロン膜とは
– 定義、構造、バインディングのメカニズム、利点
3.ニトロセルロースとナイロン膜の類似点は何ですか
– 共通機能の概要
4.ニトロセルロースとナイロン膜の違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
アフィニティ、バイオダイン A、バイオダイン B、ニトロセルロース、核酸、ナイロン、ポア サイズ、タンパク質
ニトロセルロース メンブレンとは
ニトロセルロース膜は、タンパク質結合親和性が高いため、ウェスタンブロッティングでよく使用されるマトリックスです。ただし、固定化タンパク質や糖タンパク質以外の核酸の検出にも使用できます。高分子の固定化は、主に疎水性相互作用によって行われます。水素結合は、膜のニトロ基とタンパク質のアミノ酸側鎖の間でも形成されます。タンパク質の固定化は、高塩濃度および低メタノール濃度で高くなります。
図 1:ブロットの原理
ニトロセルロース メンブレンは、表面積が大きく均一な 100% 純粋なニトロセルロースの形で入手できます。利用可能なプレサイズは、0.2 μm と 0.45 μm です。小さなポアサイズは、小さなタンパク質 (<14 kDa) との結合に適しています。タンパク質の結合および保持能力は 80 ～ 250 μg/cm です。組み立て済みのメンブレンはすぐに使用できます。ニトロセルロースメンブレンの主な利点の 1 つは、簡単にブロックできるため、バックグラウンドが非常に低いことです。サポートされているニトロセルロース膜は剥がして再プローブできます。
ナイロン メンブレンとは
ナイロン膜は、核酸の結合に広く使用されているマトリックスです。ナイロンメンブレンは、ニトロセルロースメンブレンよりも機械的に強いです。ブロッティングに使用される主なナイロンメンブレンは、Biodyne A と Biodyne B の 2 種類です。どちらのタイプのポアサイズも 0.45 μm です。熱や溶剤に耐性があります。また、縮んだり、ひび割れたり、破れたりしません。どちらもニトロセルロースメンブレンよりも低いバックグラウンドを示します。
図 2:サザン ブロット メンブレン
- バイオダイン A 未変性のナイロン 66 で構成されています。高感度と優れた分解能が Biodyne A の利点です。Biodyne A には正電荷と負電荷の両方が含まれているため、多くの種類の高分子の結合に使用できます。
- バイオダイン B は、正電荷を帯びたナイロン 66 で構成されています。したがって、DNA や RNA などの負電荷を帯びた核酸に対して優れた結合能力を備えています。
ニトロセルロースとナイロン膜の類似点
- ニトロセルロース メンブレンとナイロン メンブレンは、ブロッティング技術で高分子をゲルから移動させるために使用される 2 種類のメンブレンです。
- メンブレン上の高分子を検出できます。
- どちらのタイプのメンブレンも核酸の転写に使用できます。
- 剥がして再調査できます。
ニトロセルロースとナイロン メンブレンの違い
定義
ニトロセルロース膜は、ブロッティングで核酸やタンパク質を固定するために使用される粘着性のある膜を指し、ナイロン膜は高分子を固定するために使用される強度と耐熱性の高いタイプの膜を指します。
構成
ニトロセルロース メンブレンはニトロ化セルロースでできていますが、ナイロン メンブレンは未修飾または正電荷の Biodyne A および Biodyne B ナイロンでできています。
毛穴のサイズ
ニトロセルロース膜の孔径は 0.2 μm と 0.45 μm ですが、ナイロン膜の孔径は 0.45 μm です。
強さ
ニトロセルロース メンブレンはもろいため再利用できませんが、ナイロン メンブレンは機械的に強いです。
転送方法
電気泳動転写は主にニトロセルロース膜へのタンパク質の転写に使用されますが、ナイロン膜ではキャピラリー転写が一般的です。
親和性
ニトロセルロース メンブレンはタンパク質に高い親和性を持ち、ナイロン メンブレンは核酸に高い親和性を持ちます。ニトロセルロース膜は核酸にも使用できます。
ブロッティング
ニトロセルロース膜はウェスタンブロッティングに適していますが、ナイロン膜はサザンおよびノーザンブロッティングに適しています.
バインディングの相互作用
疎水性および静電相互作用によって高分子がニトロセルロース膜に結合し、イオン性、疎水性、静電相互作用によって高分子がナイロン膜に結合します。
タンパク質結合能力
ニトロセルロース膜のタンパク質結合容量は 80 ～ 250 μg/cm ですが、ナイロン膜のタンパク質結合容量は 150 ～ 200 μg/cm です。
結論
ニトロセルロース膜は主にウェスタンブロッティングでタンパク質を固定するために使用される脆い膜ですが、ナイロン膜は主に核酸を固定するために使用される強力な膜です。ニトロセルロースメンブレンは疎水性相互作用によって分子に結合し、ナイロンメンブレンは静電相互作用によって分子に結合します。したがって、ニトロセルロースとナイロン膜の主な違いは親和性です。
参照:
1.「ウェスタンブロッティング用ニトロセルロースメンブレン|サーモフィッシャーサイエンティフィック – LK.」サーモ フィッシャー サイエンティフィック、サーモ フィッシャー サイエンティフィック、こちらから入手可能
2. 「バイオダイン A ナイロン メンブレン、0.45 m、8 Cm x 12 Cm」サーモ フィッシャー サイエンティフィック、サーモ フィッシャー サイエンティフィック、こちらから入手可能
3. 「バイオダイン B ナイロン メンブレン、0.45 m、8 Cm x 12 Cm」サーモ フィッシャー サイエンティフィック、サーモ フィッシャー サイエンティフィック、こちらから入手可能
画像提供:
1. Gbdivers による「ブロット生物学」 – Commons Wikimedia 経由の自作 (CC BY-SA 3.0)
2. 「サザンブロット膜」Bojan Žunar – Commons Wikimedia による自身の作品 (CC BY-SA 4.0)
