主な違い サザン ノーザン ブロッティングとウエスタン ブロッティングの違いは、サザン ブロッティングには DNA の識別が含まれ、ノーザン ブロッティングには RNA の識別が含まれ、ウエスタン ブロッティングにはタンパク質の識別が含まれます。
サザン、ノーザン、ウェスタンの 3 つのブロッティング技術は、サンプル中の特定の DNA、RNA、またはタンパク質分子を検出するために使用されます。ブロッティング中、高分子はゲルからメンブレンに転写され、検出に役立つ特定の核酸または抗体と結合します。
対象となる主な分野
1.サザンブロッティングとは
– 定義、プロセス、アプリケーション
2.ノーザンブロッティングとは
– 定義、プロセス、アプリケーション
3.ウェスタンブロッティングとは
– 定義、プロセス、アプリケーション
4.サザン ノーザン ブロットとウエスタン ブロットの類似点
– 共通機能の概要
5.サザン ノーザン ブロットとウエスタン ブロットの違いは何ですか
– 主な違いの比較
主な用語
抗体、DNA、電気泳動、ノーザンブロッティング、RNA、タンパク質、サザンブロッティング、ウェスタンブロッティング
サザンブロッティングとは
サザンブロッティングは、DNA 混合物中の特定の DNA 配列を検出するために使用される技術です。サザンブロットの基本的な手順は次のとおりです。
電気泳動 – ゲル電気泳動により、サイズに基づいて DNA サンプルを異なるバンドに分離します。
転送 – 転写中、ニトロセルロースメンブレンがゲルと接触するように配置され、毛細管現象によって DNA バンドがメンブレン上に移動します。
特定のシーケンスの検出 – メンブレン上のターゲット配列は、ハイブリダイゼーション プローブと呼ばれる特定の標識オリゴヌクレオチド配列とハイブリダイズします。ハイブリダイゼーション プローブは、サイズが 100 ～ 500 bp の短い一本鎖 DNA 分子です。温度とハイブリダイゼーション バッファーの塩濃度に依存するストリンジェンシーは、ハイブリダイゼーションに影響を与えます。高温および低塩濃度によって定義される高ストリンジェンシーはハイブリダイゼーションの特異性を高め、低温および高塩濃度によって定義される低ストリンジェンシーは特異性を低下させます。
図 1:サザンブロッティング
サザンブロッティングの主な目的は、サンプル中の特定の DNA 配列を検出することです。この技術は、DNA フィンガープリンティング、父子鑑定、被害者の識別、および犯罪者の識別に使用されます。また、特定の遺伝子の同定、RFLP（制限断片長多型）、突然変異、遺伝子再構成、遺伝病、感染病原体の同定にも役立ちます。
ノーザン ブロッティングとは
ノーザンブロッティングは、RNA 混合物中の特定の RNA を検出するために使用される技術です。ノーザン ブロットの基本的な手順は次のとおりです。
電気泳動 – RNA サンプルをサイズに応じて異なるバンドに分離します。
転送 – 毛細管現象により、ゲル内の RNA バンドがメンブレンに転写されます。
特定のシーケンスの検出 – ターゲット RNA 配列は、DNA で構成される標識オリゴヌクレオチド プローブとのハイブリダイゼーションによって検出されます。
図 2:ノーザン ブロッティング
ノーザンブロッティングは、サンプル中の特定の RNA 配列を識別できるため、遺伝子発現研究に使用できます。病気の診断にも役立ちます。
ウェスタンブロッティングとは
ウエスタンブロットは、タンパク質混合物中の特定のアミノ酸配列を検出するために使用されるブロッティング技術です。ウェスタンブロットの基本的な手順は次のとおりです。
電気泳動 – 個々のタンパク質は、SDS PAGE によってサイズに基づいてバンドに分離されます。
転送 – ゲル内のタンパク質バンドは、ブロッティングによってメンブレンに転写されます。
特定のタンパク質の検出 – タンパク質が分離されたメンブレンを、特定のタンパク質にのみ結合する一次抗体とともにインキュベートします。西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) やアルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体を使用して、一次抗体を検出します。基質とインキュベートすると、酵素の作用により、膜上の特定の領域への抗体の結合が視覚化されます。
図 3:ウェスタンブロッティング
ウェスタンブロッティングは、タンパク質ブロットまたは免疫ブロッティングとも呼ばれます。サンプル中のタンパク質の数、血清中の細菌とウイルスの存在、および血清中の HIV 抗体の存在を特定できます。また、欠陥のあるタンパク質を検出することもできます。さらに、ウェスタンブロッティングは、B 型肝炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、ライム病、およびヘルペスの決定的な検査です。
サザン ノーザン ブロットとウエスタン ブロットの類似点
- サザン ブロッティング、ノーザン ブロッティング、ウェスタン ブロッティングは、サンプル内の特定の種類の高分子を識別するために使用される 3 つのブロッティング技術です。
- ブロッティング技術の 3 つのステップは、電気泳動、転写、検出です。
- 各技術には、変性と、対応する過剰な高分子によるブロッキングが必要です。
- それぞれの技術には、バイオテクノロジーと医学への応用があります。
サザン ノーザン ブロットとウエスタン ブロットの違い
定義
サザンブロッティングは、DNA の特定の配列を識別するための手順を指し、ノーザンブロッティングは、相補的 DNA とのハイブリダイゼーションによって RNA の特定の配列を検出するために使用されるサザンブロット手順の適応を指します。ウェスタンブロッティングとは、タンパク質内の特定のアミノ酸配列を特定するために使用されるブロッティング手順を指します。
開発者
サザンブロッティングは、1975 年に Edward M. Southern によって開発されました。ノーザンブロッティングは、1979 年に Alwine と彼の同僚によって開発されました。ウェスタンブロッティングは、スタンフォード大学のジョージ スタークのグループによって開発されました。 1979.
検出された分子
サザンブロッティングは特定の DNA 配列を検出し、ノーザンブロッティングは特定の RNA 配列を検出し、ウェスタンブロッティングは特定のタンパク質を検出します。
ゲル電気泳動
サザンブロッティングにはアガロースゲル電気泳動が含まれ、ノーザンブロッティングには変性ホルムアルデヒドアガロースゲルが含まれ、ウェスタンブロッティングにはSDS PAGEが含まれます.
ブロッティング法
サザンブロッティングとノーザンブロッティングはキャピラリー転写を伴いますが、ウェスタンブロッティングは電気転写を伴います.
プローブ
サザンブロッティングでは DNA プローブを使用しますが、ノーザンブロッティングでは cDNA プローブを使用し、ウェスタンブロッティングでは 一次抗体と二次抗体を使用します.
申し込み
サザンブロッティングは、特定の遺伝子配列の同定や DNA フィンガープリンティングに使用されます。ノーザンブロッティングは遺伝子発現解析に、ウェスタンブロッティングは疾患診断に使用されます。
結論
サザンブロッティングは特定の DNA 配列を識別し、ノーザンブロッティングは特定の RNA 配列を識別し、ウェスタンブロッティングはサンプル中の特定のタンパク質配列を識別します。したがって、3 つのブロッティング手法の主な違いは、検出される高分子の種類です。
参照:
1.「サザンブロッティング：原理、手順、および応用 -.」 ONLINE BIOLOGY NOTES、2017 年 12 月 4 日、こちらから入手可能
2. Kochunni、Deena T、Jazir Haneef。 「ノーザンブロッティング:原理、手順、およびアプリケーション」。生物学試験 4 U 、こちらから入手可能
3. 「ウエスタンブロット法：原理、手順、応用 -.」 BIOLOGY ONLINE NOTES、2017 年 12 月 4 日、こちらから入手可能
画像提供:
1.「Figure 17 01 05」CNX OpenStax – (CC BY 4.0)、Commons Wikimedia経由
2. 「ノーザン ブロット ダイアグラム」Ilewieszoośmiornicach 著 – Commons Wikimedia 経由の自作 (CC BY-SA 4.0)
3. Cawangによる「ウエスタンブロッティング」–コモンズウィキメディア経由の自作（CC0）
