主な違い コロニー ハイブリダイゼーションとプラーク ハイブリダイゼーションの違いは、コロニー ハイブリダイゼーションが目的の遺伝子を持つ細菌コロニーの選択に使用される方法であるのに対し、プラーク ハイブリダイゼーションは目的の遺伝子を持つファージの選択方法であるということです。 さらに、コロニー ハイブリダイゼーションはプラスミドまたはコスミド ベースのライブラリーのスクリーニングに使用でき、プラーク ハイブリダイゼーションはファージ ライブラリーのスクリーニングに使用できます。
コロニーとプラークのハイブリダイゼーションは、ゲノムまたは cDNA ライブラリーのスクリーニングに使用される 2 つの技術です。 コロニーリフトとも呼ばれます プラークリフト
対象となる主な分野
1.コロニーハイブリダイゼーションとは
– ライブラリの定義、タイプ、スクリーニング方法
2.プラークハイブリダイゼーションとは
– ライブラリの定義、タイプ、スクリーニング方法
3.コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの類似点は何ですか
– 共通機能の概要
4.コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの違いは何ですか
– 主な違いの比較
主な用語
コロニー、コロニー ハイブリダイゼーション、ライブラリ スクリーニング、プラーク、プラーク ハイブリダイゼーション
コロニー ハイブリダイゼーションとは
コロニー ハイブリダイゼーションは、目的の DNA 配列を持つ細菌コロニーの選択に使用されるスクリーニング方法です。 コロニー ブロット ハイブリダイゼーション、コロニー リフトとも呼ばれます またはレプリカメッキ .高密度に播種されたコロニーのスクリーニングが可能です。コロニーハイブリダイゼーションの元の手順は、Grunstein と Hogness によって最初に開発されました。まず、細菌コロニーをメンブレン上で形質転換し、細菌コロニーを溶解して核酸を露出させます。次に、露出した核酸を変性することでメンブレンに固定し、放射性プローブとハイブリダイズさせます。
図 1:コロニー ハイブリダイゼーション法
コロニーとは、無性生殖によって単一の細菌細胞から発生した細菌の塊です。したがって、特定のコロニー内のすべての細菌細胞は、同じ遺伝子構造と形質転換された遺伝物質を持っています。一般に、細菌はプラスミドまたはコスミドベクターを利用して形質転換されます。
プラーク ハイブリダイゼーションとは
プラーク ハイブリダイゼーションは、組換えファージのスクリーニング方法です。これは、1977 年の Benton と Devis によるコロニー ハイブリダイゼーションの修正版です。この方法は、プラーク リフトとも呼ばれます。 .プラーク ハイブリダイゼーション手順はコロニー ハイブリダイゼーション手順と同様であり、プラークはニトロセルロース膜に接触させることによって持ち上げられます。次に、核酸が膜に露出して固定され、目的のプローブとハイブリダイズします。
図 2:寒天プレート上のプラーク
プラークは、特定のバクテリオファージがその領域で細菌細胞を溶解することによって生成される、寒天プレート上の透明なゾーンです。ニトロセルロース膜に転写される DNA の量が少ないため、プラーク ハイブリダイゼーションで生成されるバックグラウンド シグナルが少なくなります。
コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの類似点
- コロニーおよびプラーク ハイブリダイゼーションは、ゲノム ライブラリーまたは cDNA ライブラリーのスクリーニングに使用される 2 つの技術です。
- 両方の技術の主な原理は、核酸ハイブリダイゼーションです。
- どちらもフィルター ハイブリダイゼーション法であり、ニトロセルロース メンブレン上での in situ 複製によるライブラリの一次スクリーニングを可能にします。
- 高密度スクリーニングが可能です。
- 一本鎖 DNA 分子がプローブとして使用され、特定の配列を識別するためにその相補配列にハイブリダイズできます。
- どちらのハイブリダイゼーション技術も迅速で、非常に多くのクローンを処理できます。
- 発現できない不完全な遺伝子配列の同定に使用されます。
コロニーとプラーク ハイブリダイゼーションの違い
定義
コロニー ハイブリダイゼーションは、目的の遺伝子を持つ細菌のコロニーを選択する方法を指し、プラーク ハイブリダイゼーションは組換えファージの同定に使用されるスクリーニング方法を指します。
開発者
コロニー ハイブリダイゼーションは Grunstein と Hogness によって最初に開発され、プラーク ハイブリダイゼーションは 1977 年に Benton と Devis によって最初に開発されました。
図書館の種類
コロニー ハイブリダイゼーションには、プラスミド ベースまたはコスミド ベースのライブラリーの識別が含まれ、プラーク ハイブリダイゼーションにはファージ ライブラリーの識別が含まれます。
リフト数
コロニーは 1 回持ち上げることができますが、プラークは数回持ち上げることができます。
バックグラウンド シグナル
コロニー ハイブリダイゼーションではより多くのバックグラウンド シグナルが発生しますが、プラーク ハイブリダイゼーションではバックグラウンド シグナルが少なくなります。
結論
コロニー ハイブリダイゼーションは、プラスミドまたはコスミド ベクターで作成されたライブラリー内の細菌コロニーのスクリーニング方法です。一方、プラークハイブリダイゼーションは、ファージライブラリーにおけるバクテリオファージのスクリーニング方法です。コロニー ハイブリダイゼーションとプラーク ハイブリダイゼーションの主な違いは、各方法でスクリーニングされるライブラリの種類です。
参照:
1. カクソネン、アンナ。 「微生物群集分析のための分子的アプローチ」。浸出 – BioMineWiki、2006 年 4 月 20 日、こちらから入手可能
2.デール、J W、および P J グリーナウェイ。 「プラークハイブリダイゼーションによる組換えファージの同定」。 Methods in Molecular Biology (クリフトン、ニュージャージー州)、米国国立医学図書館、こちらから入手可能
画像提供:
1. Kaksonen による「ブロット ハイブリダイゼーション」 – http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (パブリック ドメイン)、Commons Wikimedia 経由
2. 「M. smegmatis プラーク」Wazzzup7up 著 – Commons Wikimedia 経由の自身の作品 (パブリック ドメイン)
