1。関心の遺伝子の分離：
* 出典： 望ましい遺伝子は、元の生物（細菌、植物、動物など）から得られます。
* メソッド： これには次のことが含まれます。
* 制限酵素消化： 特定の酵素は、正確な配列でDNAを切断します。
* PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）： 特定のDNAフラグメントを増幅します。
2。ベクトルの準備：
* ベクトルの選択： 適切なベクター（プラスミド、ウイルスなど）が選択されます。ベクトルは、ホストセルで複製できる必要があります。
* 制限酵素消化： ベクターは、目的の遺伝子に使用されるのと同じ制限酵素で切断され、互換性のある端を作成します。
* ライゲーション： 目的の遺伝子と開いたベクターは、DNAリガーゼを使用して組み合わされ、DNAを密閉します。
3。変換：
* ホストセルへの紹介： 組換えDNAは、宿主細胞（例：細菌、酵母）に導入されます。
* メソッド： 一般的な方法は次のとおりです。
* 化学変換： 細胞は、DNAに対する透過性を増加させる化学物質で処理されます。
* エレクトロポレーション： 短い電気パルスは、細胞膜に一時的な毛穴を作り出します。
4。形質転換細胞の選択：
* マーカー遺伝子： ベクターは、多くの場合、組換えDNAを含む細胞の同定を可能にするマーカー遺伝子（抗生物質耐性など）を運びます。
* 選択メディアの成長： 細胞は抗生物質を含む培地で成長します。マーカー遺伝子を持つ細胞のみが生き残り、増殖します。
5。遺伝子産物の生産：
* 式： 形質転換された細胞は大量に増殖し、目的の遺伝子が発現します。
* タンパク質生産： 遺伝子のDNAはmRNAに転写され、それが目的のタンパク質に翻訳されます。
* 精製（オプション）： タンパク質が望ましい製品である場合、他の細胞成分を除去することが精製される場合があります。
覚えておくべきキーポイント：
* 制限酵素： これらは分子はさみのように作用し、特定の配列でDNAを切断し、他のDNAフラグメントに互換性のある端をベースペアにできる「粘着性の端」を残します。
* ベクトル： これらは、関心のある遺伝子を宿主細胞に運ぶ車両です。プラスミドは、細菌で独立して複製するDNAの円形の断片です。ウイルスベクターは、遺伝子を宿主のゲノムに統合できます。
* マーカー遺伝子： これらの遺伝子は、形質転換細胞の選択を可能にします。
* 変換効率： 外来DNAを細胞に導入するプロセスは、100％効率的ではありません。 すべての細胞が組換えDNAを正常に取り上げるわけではありません。
このプロセスの具体的な側面の詳細が必要な場合はお知らせください！
