1。細胞溶解:
- 細胞に溶解バッファー(SDSのような洗剤を含む)を追加すると、細胞膜と核膜を分解し、DNAを溶液に放出します。
-NaClは DNAを安定させるのに役立ちます 洗剤からのDNA骨格上の負に帯電したリン酸塩基を保護することにより。これにより、DNAが過度に変性して劣化するのを防ぎます。
2。タンパク質の沈殿:
- 細胞溶解の後、溶解物にはDNA、タンパク質、およびその他の細胞破片の混合物が含まれています。
- 溶解物にNaClを追加すると、タンパク質が溶液から沈殿します。
- これは、NaCl がタンパク質の電荷を中和するために起こります 、それらをより溶けやすく、一緒に凝集する傾向があります。
- その後、沈殿したタンパク質は遠心分離によって除去され、DNAを上清に残します。
3。 DNA沈殿:
- 一部のDNA抽出プロトコルでは、NACLも最終ステップで使用され、DNA自体を沈殿させます。
- 上清にイソプロパノールまたはエタノールを添加することにより、DNAの可溶性が低くなり、溶液から沈殿します。
- NaClの存在は、DNA分子をさらに脱水することによりこのプロセスを強化し、凝集をより多くしやすくします。
要約:
-NaClはDNAを分離する主体ではありませんが、以下によって重要なサポート役割を果たします。
- 細胞溶解中にDNAを安定化します。
- タンパク質の沈殿を促進し、溶解物からの除去を可能にします。
- DNAの沈殿を強化し、その浄化を支援します。
DNA抽出におけるNaClの役割を理解することは、プロトコル内の各成分の重要性を理解し、DNAの収率と純度を改善するために抽出プロセスを最適化できるようにすることができます。