サザンブロッティングの仕組み

サザンブロッティングは、サンプル内の特定の DNA フラグメントを検出するために使用される技術です。ブロッティング技術には、ゲル電気泳動によるサイズに基づく DNA フラグメントの分離、サイズ分画された DNA サンプルのフィルター膜への転写、特定の DNA フラグメントと標識された配列特異的プローブとのハイブリダイゼーション、および標識バンドの検出が含まれます。

サンプル中の特定の DNA の同定に加えて、特定の種類の DNA のサイズと存在量もサザンブロッティングによって決定できます。サザンブロッティングのプロセスについては、この記事で説明しています。

対象となる主な分野

1.サザンブロッティングとは
– 定義、原理、応用
2.サザンブロッティングの仕組み
– サザンブロッティングのプロセス

重要な用語:DNA、ゲル電気泳動、ハイブリダイゼーション プローブ、ナイロン膜、制限消化、サザンブロッティング

サザンブロッティングとは

サザンブロッティングは、サンプル中の特定の DNA の同定に使用されるハイブリダイゼーション技術です。この技術は、1975 年に Edward M. Southern によって最初に開発されました。このプロセスは、サンプル内の特定の DNA 配列の DNA 配列、サイズ、および存在量を識別します。

サザンブロッティング膜を 図 1 に示します。

図 1:サザンブロッティング膜

サザンブロッティングの応用

以下に、サザンブロッティングのアプリケーションについて説明します。

サザンブロッティングの仕組み

サザンブロッティングでは、ゲル電気泳動によるサイズに基づく DNA フラグメントの分離、メンブレンへの転写、標識された配列特異的プローブとのハイブリダイゼーション、および標識バンドの検出が行われます。 .サザンブロッティングの手順は以下のとおりです。

図 2:サザンブロッティング

サザンブロッティングの全プロセスを 図 2 に示します .

結論

サザンブロッティングは、サンプルからの特定の DNA 配列の同定に使用されるハイブリダイゼーション技術です。このプロセスでは、DNA サンプルを制限酵素によって分画し、混合物をゲルに流します。次に、ゲルのバンドパターンをナイロンメンブレンに転写し、標識プローブとハイブリダイズさせて、目的のフラグメントを検出します。

参照:

1.「サザンブロッティング」。 サーモ フィッシャー サイエンティフィック 、ここから入手できます。

画像提供:

1.「サザンブロット膜」Bojan Žunar – Commons Wikimedia による自身の作品 (CC BY-SA 4.0)
2. 「図 17 01 05」CNX OpenStax 著 – (CC BY 4.0) Commons Wikimedia 経由