1。 DNaseの阻害 ：血液には、ヌクレアーゼを含むさまざまな酵素が含まれており、適切に阻害されないとDNAを分解する可能性があります。過塩素酸ナトリウムは、特にその活性にマグネシウムまたはカルシウムを必要とするDNaseの阻害剤として作用します。これらの金属イオンに結合するため、酵素触媒反応に関与し、DNAが分解から保護するのを防ぎます。
2。タンパク質降水 ：過塩素酸ナトリウムは、DNA分離のタンパク質沈殿段階で一般的に使用されます。細胞溶解物または懸濁液に加えて、赤血球に豊富なヘモグロビンを含むタンパク質の沈殿を誘導します。過塩素酸ナトリウムによって生じる高塩濃度は、タンパク質の溶解度を破壊し、遠心分離時に凝集してペレットを形成します。これにより、DNAを含む上清を沈殿したタンパク質から分離できます。
3。核酸沈殿 ：タンパク質沈殿後に得られた上清から、ゲノムDNAを含む核酸を沈殿させるために、過塩素酸ナトリウムを使用することもできます。これは、DNA分子の溶解度を低下させることにより達成します。エタノールまたはイソプロパノールが過塩素酸ナトリウムとともに上清に添加されると、DNAは不溶性になり、可視沈殿物を形成します。この沈殿物は、遠心分離によって収集され、さらに精製されて純粋なゲノムDNAを得ることができます。
4。汚染物質の除去 ：過塩素酸ナトリウムは、DNA調製からタンパク質、他の高分子、塩などの汚染物質の除去を支援します。過塩素酸ナトリウムで達成された高塩濃度は、不純物の効率的な沈殿に役立ち、精製されたDNAを残します。
5。 DNA収量と品質の最適化 ：ゲノムDNA分離における過塩素酸ナトリウムの使用は、抽出されたDNAの収量と品質の両方を最適化することができます。 DNASEを効果的に阻害することにより、DNAの分解を防ぎ、分離DNAの完全性と高分子量を確保します。さらに、汚染物質を効率的に除去すると、DNA調製の全体的な純度が向上し、さまざまな下流の分子生物学用途に適しています。
全体として、DNaseを阻害し、タンパク質と核酸沈殿を促進し、汚染物質を除去し、分離DNAの品質と収量を高めることにより、過塩素酸ナトリウムはヒト血液からのゲノムDNA分離に重要な役割を果たします。
