主な違い ニトロセルロースと PVDF メンブレンの違いは、ニトロセルロース メンブレンのタンパク質結合能力が高いのに対し、PVDF メンブレンのタンパク質結合能力は比較的低いことです。 さらに、タンパク質分子は疎水性相互作用を介してニトロセルロース膜に結合し、タンパク質分子は疎水性相互作用と双極子相互作用の両方を介して PVDF 膜に結合します。さらに、ニトロセルロース膜は PVDF 膜よりも感度が高くなります。
ニトロセルロースと PVDF メンブレンは、ゲル電気泳動によって分離されたタンパク質を転写するウエスタンブロットで使用される 2 種類のメンブレンです。一般に、ブロッティングにおけるメンブレンの主な機能は、タンパク質断片を保持する物理的な足場として機能することです。
対象となる主な分野
1. ニトロセルロース膜とは
– 定義、特徴、重要性
2. PVDF メンブレンとは
– 定義、特徴、重要性
3. ニトロセルロースと PVDF メンブレンの類似点
– 共通機能の概要
4. ニトロセルロースと PVDF メンブレンの違いは何ですか
– 主な相違点の比較
主な用語
ニトロセルロース膜、タンパク質結合能、PVDF 膜、感度、ウエスタンブロット
ニトロセルロース膜とは
ニトロセルロース膜は、ウェスタンブロッティングに使用される最初のタイプの膜の 1 つです。瞬間的でほとんど元に戻せないため、この手法では依然として最も一般的な選択肢です。また、ニトロセルロース膜は容易に水和されます。ただし、ストリッピング、リプロービング、または過酷な化学処理には適していません。支持されたニトロセルロース膜は、不活性な支持構造が強度と弾力性を高めるため、セットの選択肢の 1 つです。
図 1:電気泳動転写
さらに、ウェスタンブロッティングでは、電気泳動転写と呼ばれるプロセスで、ゲル上のタンパク質断片がニトロセルロース膜に転写されます。このプロセスの背後にある原理は、負に帯電したタンパク質がアノードに向かって移動することです。
PVDF メンブレンとは
PVDF メンブレンは、ウェスタンブロッティングで使用されるもう 1 つのタイプのメンブレンです。ニトロセルロースメンブレンと比較して、タンパク質結合能が高いです。したがって、これにより検出感度も向上します。ただし、感度が高くなると、発現の低いタンパク質が検出されるため、バックグラウンドが高くなります。
図 2:ニトロセルロース膜
さらに、ニトロセルロース メンブレンに関しては、PVDF メンブレンをトランスファー バッファーと共に使用する前に、メタノールで事前に湿らせる必要はありません。これにより、低 SDS/高メタノール溶液による高分子量タンパク質の沈殿が防止されます。一方、転写バッファーに SDS が存在すると、PVDF メンブレンでのブロッティング効率が向上します。
ニトロセルロースと PVDF メンブレンの類似点
- ニトロセルロースと PVDF メンブレンは、ウェスタンブロットで使用されるメンブレン。
- これらは、分離されたゲル上のタンパク質フラグメント。
- さらに、変換プロセスは電気泳動転写と呼ばれるプロセス。
- タンパク質は主に疎水性を介して膜に結合します相互作用。
- 典型的な細孔サイズは 0.1、0.2または0.45 μm。基本的に、小さなペプチドや 15 kDa 未満の低分子量タンパク質では、0.1 および 0.2 μm のポア サイズが重要です。 0.45 μm のメンブレンは、ほとんどのタンパク質ブロッティングに適しています。一方、タンパク質の定量化や低濃度でロードする場合は、小さいポアサイズを使用することをお勧めします。
- さらに、プレカットとプレメタノールで湿潤した膜は、利便性、再現性、およびハイスループットのアプリケーションに最適です。
- どちらも非常に高いタンパク質結合能力を持ち、感度。
- また、バックグラウンドと非特異的結合。
- さらに、特定のタンパク質は化学発光 および蛍光法。
ニトロセルロースと PVDF メンブレンの違い
定義
ニトロセルロース膜は、ウエスタンブロットでタンパク質を固定するために使用される粘着性のある膜を指します。一方、PVDFメンブレンは、ウェスタンブロットで使用される、高い結合能力を備えたタンパク質転写用の別のタイプのメンブレンを指します。
身体的特徴
PVDF メンブレンは物理的に耐久性がありますが、ニトロセルロース メンブレンはもろくて壊れやすいです。
耐薬品性
ニトロセルロース メンブレンは耐薬品性がありませんが、PVDF メンブレンは耐薬品性があります。
プレウェッティング
ニトロセルロース メンブレンはメタノールで事前に濡らす必要がありますが、PVDF メンブレンは事前に濡らす必要はありません。
タンパク質結合能力
さらに、ニトロセルロース膜のタンパク質結合能力は比較的低く (80-100 μg/cm2)、PVDF 膜のタンパク質結合能力は高くなります (170-200 μg/cm2)。 ）。
タンパク質の相互作用
タンパク質は疎水性相互作用を介してニトロセルロース膜に結合し、疎水性相互作用と双極子相互作用の両方を介して PVDF 膜に結合します。
SDS
ニトロセルロースメンブレンは、転写バッファーに SDS を必要としません。これにより、低分子量タンパク質の結合が強化され、メンブレンを介したタンパク質の過剰転写が防止され、SDS はブロッティング効率が向上します。 PVDFメンブレンへのタンパク質の転写。
ウェスタンブロッティングでの使用
低分子量タンパク質にはニトロセルロース膜が使用され、高分子量タンパク質にはPVDF膜が使用されます。
感度
さらに、ニトロセルロース膜は比較的感度が低く、PVDF 膜は結合能が高いため感度が高くなります。
背景
ニトロセルロース メンブレンは感度が低いためバックグラウンドが低くなりますが、PVDF メンブレンは発現の低いタンパク質の検出感度が高いためバックグラウンドが高くなります。
ストリッピングとリプローブ
これらに加えて、ニトロセルロース メンブレンは剥がして再プローブするのが困難ですが、PVDF メンブレンは疎水性が高いため、剥がして再プローブするのが簡単です。
その他の用途
ニトロセルロース メンブレンは、核酸 (<300 bp)、アミノ酸分析、およびドット/スロット ブロットの分析に使用され、PVDF メンブレンはタンパク質配列決定、アミノ酸分析に使用されます。分析、および固相アッセイ システム。
結論
ニトロセルロース膜は、ウエスタンブロットで重要なタイプの膜です。ただし、タンパク質結合能と感度は比較的低いです。また、バックグラウンドも低くなります。さらに、主に高分子量タンパク質の分離に使用されます。 PVDF メンブレンは、高分子量タンパク質の分離用のウェスタンブロットで使用されるもう 1 つのタイプのメンブレンです。さらに、この膜は、比較的高いタンパク質結合能力と感度を備えています。ただし、バックグラウンドが高くなります。したがって、ニトロセルロースと PVDF メンブレンの主な違いは、タンパク質結合能力と感度です。
