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ニンヒドリン試験


ニンヒドリン (式 C9H6O4 と IUPAC 名 2,2-ジヒドロキシベンゼン-1,3-ジオンを有する化学分子) を検体の試験溶液に加えると、結果はニンヒドリン濃度として知られています。検体中の濃い青色の発色は、アンモニア、第一級または第二級アミン、またはアミノ酸の存在によるものと考えられています。

ニンヒドリンの検査

検体のアミノ基は、ジケトヒドリンに匹敵する分子の形成をもたらします。この組み合わせの色は、ルーエマンの紫と呼ばれることもある濃い青です。

遊離アミノ酸のアミノ基は、酸化剤として作用する性質を持つニンヒドリンとの化学反応を受けます。ニンヒドリンにさらされると、アミノ酸は酸化的脱アミノ化を受け、CO2、NH3、アルデヒドが放出され、ヒドリダンチンやその他の反応副産物 (ニンヒドリンの還元型) が形成されます。

この反応の結果、アンモニアはさらに別のニンヒドリン分子と反応し、ジケトヒドリン (ルーエマン錯体としても知られる) が形成されます。鮮やかな青色は、この化合物の存在によるものです。プロリンはアミノ酸であるため、検体にプロリンなどのアミノ酸が含まれていると黄色の化合物が生成されます。アスパラギンを使用すると、得られる複合体は茶色になります。

ニンヒドリン テストは次の原則に基づいています:

<オール>
  • ルーヘマン紫として知られる濃い紫または青色は、化合物ニンヒドリン (2,2-ジヒドロキシインダン-1,3-ジオン) の 2 つの分子が遊離α-アミノ酸と反応すると生成されます。この反応の理由は不明です。
  • この反応で使用すると、酸化剤ニンヒドリンが高温でアミノ酸の脱アミノ化と脱炭酸反応を引き起こし、プロセスが進行します。
  • この反応に続いて、還元されたニンヒドリン分子、放出されたアンモニア、および最初の反応の生成物であるニンヒドリンの 2 番目の分子が縮合します。
  • ジケトヒドリンの複合体を構築するには、反応時間全体が必要です。この複合体は、最終的に濃い紫色になります。
  • この検査では、プロリンやヒドロキシプロリンなどのアミノ酸を検査すると、黄橙色のイミニウム塩が生成されます。
  • ニンヒドリン試薬と反応してオレンジ色の結果を生成する、アミノ酸アスパラギンなどの遊離アミノ基を含むタンパク質にも同じことが言えます。
  • 形成された複合体の強度は、形成溶液中のアミノ酸の濃度に関連しています。
  • さらに、存在するアミノ酸の種類は、色の明るさに影響します。
  • ニンヒドリン検査の手順

    <オール>
  • ニンヒドリンの 2% 溶液は、最初に 0.2 グラムの薬物を 10 ml のエタノールまたはアセトンに溶解して作成する必要があります。その後、ソリューションを使用できます。
  • この時点で、蒸留水でアミノ酸 (分析物) の 1% 溶液を作る必要があります。この溶液を機能させるには、この溶液に 2 パーセントのニンヒドリン溶液を数滴加える必要があります。
  • 試験管を温水浴に約 5 分間入れる必要があります。
  • 結論

    したがって、アミノ酸の存在、濃い青/紫の発色はそれらの存在を示していると結論付けることができます.

    ニンヒドリン試験結果の解釈

    アンモニア、第一級/第二級アミン、およびアミノ酸はすべて、光にさらされると濃い紫色を発します。

    黄色は、アミノ酸のヒドロキシプロリンとプロリンから作られます。

    アスパラギンを使用すると茶色になります。

    色の変化が検出されない場合、検体にはアミノ酸、アミン、またはアンモニアが含まれていないと見なされます。



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